中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2009年
8期
565-568
,共4页
邵阳光%李妍%王春玉%佟宇鑫%李丰
邵暘光%李妍%王春玉%佟宇鑫%李豐
소양광%리연%왕춘옥%동우흠%리봉
p21活化激酶4%绿色荧光蛋白%融合蛋白%转染%胃癌
p21活化激酶4%綠色熒光蛋白%融閤蛋白%轉染%胃癌
p21활화격매4%록색형광단백%융합단백%전염%위암
目的 构建真核表达载体pEGFP-PAK4,利用它鉴定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌细胞中的定位,并检测外源性和内源性PAK4在胃癌细胞中的表达.方法 以pCAN2-MYC-PAK4为模板,采用PCR法进行人PAK4编码序列的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.将pCAN2-MYC-PAK4质粒瞬时转染到胃癌BGC-823细胞中,用Western blot方法检测MY-PAK4融合蛋白的表达;并用Western blot方法检测不同胃癌细胞系中内源性PAK4的表达;瞬时转染pEGFP-PAK4到胃癌BGC-823细胞中,用激光扫描共聚焦显微镜观察PAK4的定位.结果 (1)hPAK4编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;(2)证实了MYC-PAK4融合蛋白及内源性PAK4在胃癌细胞中的表达;(3)转染pEGFP-PAK4后,在胃癌BGC-823细胞胞质内可见明亮的绿色荧光.结论 成功地构建了pEGFP-PAK4载体,证实了外源性和内源性PAK4的表达,证明在胃癌BGC-823细胞中PAK4主要定位于细胞质,为进一步研究PAK4的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础.
目的 構建真覈錶達載體pEGFP-PAK4,利用它鑒定p21活化激酶4(PAK4)在胃癌細胞中的定位,併檢測外源性和內源性PAK4在胃癌細胞中的錶達.方法 以pCAN2-MYC-PAK4為模闆,採用PCR法進行人PAK4編碼序列的擴增,併將其剋隆至真覈錶達載體pEGFP-C1中.將pCAN2-MYC-PAK4質粒瞬時轉染到胃癌BGC-823細胞中,用Western blot方法檢測MY-PAK4融閤蛋白的錶達;併用Western blot方法檢測不同胃癌細胞繫中內源性PAK4的錶達;瞬時轉染pEGFP-PAK4到胃癌BGC-823細胞中,用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察PAK4的定位.結果 (1)hPAK4編碼序列被成功剋隆至真覈錶達載體pEGFP-C1中;(2)證實瞭MYC-PAK4融閤蛋白及內源性PAK4在胃癌細胞中的錶達;(3)轉染pEGFP-PAK4後,在胃癌BGC-823細胞胞質內可見明亮的綠色熒光.結論 成功地構建瞭pEGFP-PAK4載體,證實瞭外源性和內源性PAK4的錶達,證明在胃癌BGC-823細胞中PAK4主要定位于細胞質,為進一步研究PAK4的生物學特性及其信號轉導通路奠定瞭基礎.
목적 구건진핵표체재체pEGFP-PAK4,이용타감정p21활화격매4(PAK4)재위암세포중적정위,병검측외원성화내원성PAK4재위암세포중적표체.방법 이pCAN2-MYC-PAK4위모판,채용PCR법진행인PAK4편마서렬적확증,병장기극륭지진핵표체재체pEGFP-C1중.장pCAN2-MYC-PAK4질립순시전염도위암BGC-823세포중,용Western blot방법검측MY-PAK4융합단백적표체;병용Western blot방법검측불동위암세포계중내원성PAK4적표체;순시전염pEGFP-PAK4도위암BGC-823세포중,용격광소묘공취초현미경관찰PAK4적정위.결과 (1)hPAK4편마서렬피성공극륭지진핵표체재체pEGFP-C1중;(2)증실료MYC-PAK4융합단백급내원성PAK4재위암세포중적표체;(3)전염pEGFP-PAK4후,재위암BGC-823세포포질내가견명량적록색형광.결론 성공지구건료pEGFP-PAK4재체,증실료외원성화내원성PAK4적표체,증명재위암BGC-823세포중PAK4주요정위우세포질,위진일보연구PAK4적생물학특성급기신호전도통로전정료기출.
