浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2010年
4期
363-369
,共7页
闫啸%徐立仁%关怡新%姚善泾
閆嘯%徐立仁%關怡新%姚善涇
염소%서립인%관이신%요선경
亲环蛋白A%可溶表达%培养优化
親環蛋白A%可溶錶達%培養優化
친배단백A%가용표체%배양우화
为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入Escherichia coli BL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g·L-1,酵母提取物10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,甘露醇10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol·L-1 IPTG诱导,然后在30 ℃、180 r·min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg·L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.
為穫得高錶達量的可溶親環蛋白A(cyclophilin A,CypA),對重組CypA質粒錶達和工程菌的培養過程進行研究.首先將pRSET-CypA質粒轉入Escherichia coli BL21菌株,穫得錶達CypA的重組工程菌;然後以2×YT為基本培養基,對培養基組成包括碳源、氮源和氨芐青黴素濃度進行優化,併攷察接種量和誘導條件(誘導劑濃度、誘導時機、誘導後培養時間)等對目標蛋白錶達量的影響.結果錶明:通過控製培養溫度和轉速可大大減少CypA包涵體的量;以甘露醇為碳源能顯著提高目標蛋白的錶達量;優化的培養基組成為蛋白胨16 g·L-1,酵母提取物10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,甘露醇10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;在對數生長期中期OD600為1.3時加入1 mmol·L-1 IPTG誘導,然後在30 ℃、180 r·min-1條件下繼續培養9 h收穫菌體;優化後目標蛋白CypA產量為66.7 mg·L-1髮酵液,與優化前相比提高瞭76.6%.
위획득고표체량적가용친배단백A(cyclophilin A,CypA),대중조CypA질립표체화공정균적배양과정진행연구.수선장pRSET-CypA질립전입Escherichia coli BL21균주,획득표체CypA적중조공정균;연후이2×YT위기본배양기,대배양기조성포괄탄원、담원화안변청매소농도진행우화,병고찰접충량화유도조건(유도제농도、유도시궤、유도후배양시간)등대목표단백표체량적영향.결과표명:통과공제배양온도화전속가대대감소CypA포함체적량;이감로순위탄원능현저제고목표단백적표체량;우화적배양기조성위단백동16 g·L-1,효모제취물10 g·L-1,NaCl 5 g·L-1,감로순10 g·L-1,Amp 50 mg·L-1;재대수생장기중기OD600위1.3시가입1 mmol·L-1 IPTG유도,연후재30 ℃、180 r·min-1조건하계속배양9 h수획균체;우화후목표단백CypA산량위66.7 mg·L-1발효액,여우화전상비제고료76.6%.
