微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2011年
1期
20-23
,共4页
何素梅%周见远%肖建华%聂东宋
何素梅%週見遠%肖建華%聶東宋
하소매%주견원%초건화%섭동송
丙型肝炎病毒%包膜蛋白%原核表达%载体构建%抗原性
丙型肝炎病毒%包膜蛋白%原覈錶達%載體構建%抗原性
병형간염병독%포막단백%원핵표체%재체구건%항원성
构建丙型肝炎HCV包膜蛋白糖蛋白的E2基因原核表达载体,获得大量重组HCVE2蛋白,进行E2蛋白的抗原性及潜在保护作用研究.通过RT-PCR从HCVRNA阳性血清标本中扩增出975bp (383～708)E2基因片段,PCR产物经EcoR I和Sall I双酶切后连接到经同样酶切的PET-41a原核表达载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经Amp筛选,得到阳性重组质粒PET41a-HCVE2菌株,并以IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE鉴定,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用ELLSA方法检测生物学活性.结果表明,构建的HCVE2包膜蛋白基因片段原核表达质粒所表达产物主要以包涵体形式存在,表达的融合蛋白与HCV阳性血清具有较好的反应原性.以HCVE2融合蛋白检测患者阳性血清具有良好的抗原性,有望能提高HCV抗体检测试剂盒的检出率.
構建丙型肝炎HCV包膜蛋白糖蛋白的E2基因原覈錶達載體,穫得大量重組HCVE2蛋白,進行E2蛋白的抗原性及潛在保護作用研究.通過RT-PCR從HCVRNA暘性血清標本中擴增齣975bp (383～708)E2基因片段,PCR產物經EcoR I和Sall I雙酶切後連接到經同樣酶切的PET-41a原覈錶達載體上,轉化到大腸桿菌BL21(DE3)菌株,經Amp篩選,得到暘性重組質粒PET41a-HCVE2菌株,併以IPTG誘導蛋白錶達,SDS-PAGE鑒定,錶達產物經固定化金屬配體親和層析純化,用ELLSA方法檢測生物學活性.結果錶明,構建的HCVE2包膜蛋白基因片段原覈錶達質粒所錶達產物主要以包涵體形式存在,錶達的融閤蛋白與HCV暘性血清具有較好的反應原性.以HCVE2融閤蛋白檢測患者暘性血清具有良好的抗原性,有望能提高HCV抗體檢測試劑盒的檢齣率.
구건병형간염HCV포막단백당단백적E2기인원핵표체재체,획득대량중조HCVE2단백,진행E2단백적항원성급잠재보호작용연구.통과RT-PCR종HCVRNA양성혈청표본중확증출975bp (383～708)E2기인편단,PCR산물경EcoR I화Sall I쌍매절후련접도경동양매절적PET-41a원핵표체재체상,전화도대장간균BL21(DE3)균주,경Amp사선,득도양성중조질립PET41a-HCVE2균주,병이IPTG유도단백표체,SDS-PAGE감정,표체산물경고정화금속배체친화층석순화,용ELLSA방법검측생물학활성.결과표명,구건적HCVE2포막단백기인편단원핵표체질립소표체산물주요이포함체형식존재,표체적융합단백여HCV양성혈청구유교호적반응원성.이HCVE2융합단백검측환자양성혈청구유량호적항원성,유망능제고HCV항체검측시제합적검출솔.
