畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
2期
228-235
,共8页
朱剑%康超%张安定%金梅林
硃劍%康超%張安定%金梅林
주검%강초%장안정%금매림
猪链球菌2型%分泌核酸酶(SsnA)%鉴别诊断%ELISA
豬鏈毬菌2型%分泌覈痠酶(SsnA)%鑒彆診斷%ELISA
저련구균2형%분비핵산매(SsnA)%감별진단%ELISA
猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)是一种广泛分布的人畜共患病原菌,严重危害着人类健康和养猪业的发展.本试验旨在研究分泌核酸酶基因(SsnA)作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用.作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增SsnA基因片段,将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为46 ku的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白质具有抗原反应活性.以纯化的融合蛋白作为包被抗原,建立了SsnA-ELISA鉴别诊断方法.对已知背景的人工感染及疫苗免疫血清和临床血清进行检测,比较感染血清和免疫血清的检测结果,结果发现两者差异显著(P＜0.05),表明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的检测效果.利用该方法对采集自8个省份的1 446份血清进行检测,显示SS2的阳性率为0%～14.77%,平均阳性率为5.39%.本研究结果表明:猪链球菌2型SsnA可以作为一个良好的鉴别感染的分子诊断标识;对临床血清的检测结果表明感染及流行与气候环境存在明显的关系.
豬鏈毬菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)是一種廣汎分佈的人畜共患病原菌,嚴重危害著人類健康和養豬業的髮展.本試驗旨在研究分泌覈痠酶基因(SsnA)作為分子診斷標識在對SS2感染的鑒彆診斷中所起的作用.作者以SS2-LT菌株基因組DNA為模闆,通過PCR擴增SsnA基因片段,將該片段剋隆到錶達載體pET-28a(+)中,在大腸桿菌BL21(DE3)中成功錶達,穫得大小為46 ku的融閤蛋白,經SDS-PAGE和Western blot分析錶明,重組蛋白質具有抗原反應活性.以純化的融閤蛋白作為包被抗原,建立瞭SsnA-ELISA鑒彆診斷方法.對已知揹景的人工感染及疫苗免疫血清和臨床血清進行檢測,比較感染血清和免疫血清的檢測結果,結果髮現兩者差異顯著(P＜0.05),錶明建立的SsnA-ELISA方法具有良好的檢測效果.利用該方法對採集自8箇省份的1 446份血清進行檢測,顯示SS2的暘性率為0%～14.77%,平均暘性率為5.39%.本研究結果錶明:豬鏈毬菌2型SsnA可以作為一箇良好的鑒彆感染的分子診斷標識;對臨床血清的檢測結果錶明感染及流行與氣候環境存在明顯的關繫.
저련구균2형(Streptococcus suis type 2,SS2)시일충엄범분포적인축공환병원균,엄중위해착인류건강화양저업적발전.본시험지재연구분비핵산매기인(SsnA)작위분자진단표식재대SS2감염적감별진단중소기적작용.작자이SS2-LT균주기인조DNA위모판,통과PCR확증SsnA기인편단,장해편단극륭도표체재체pET-28a(+)중,재대장간균BL21(DE3)중성공표체,획득대소위46 ku적융합단백,경SDS-PAGE화Western blot분석표명,중조단백질구유항원반응활성.이순화적융합단백작위포피항원,건립료SsnA-ELISA감별진단방법.대이지배경적인공감염급역묘면역혈청화림상혈청진행검측,비교감염혈청화면역혈청적검측결과,결과발현량자차이현저(P＜0.05),표명건립적SsnA-ELISA방법구유량호적검측효과.이용해방법대채집자8개성빈적1 446빈혈청진행검측,현시SS2적양성솔위0%～14.77%,평균양성솔위5.39%.본연구결과표명:저련구균2형SsnA가이작위일개량호적감별감염적분자진단표식;대림상혈청적검측결과표명감염급류행여기후배경존재명현적관계.
