植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2011年
5期
50-55
,共6页
樊东%高艳玲%郭博智%韩岚岚%周长梅%王晓云%刘健
樊東%高豔玲%郭博智%韓嵐嵐%週長梅%王曉雲%劉健
번동%고염령%곽박지%한람람%주장매%왕효운%류건
八字地老虎%β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶%克隆%原核表达%纯化
八字地老虎%β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶%剋隆%原覈錶達%純化
팔자지로호%β-N-을선포도당알당감매%극륭%원핵표체%순화
[目的]克隆八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并进行原核表达.[方法]以八字地老虎预蛹期幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术克隆基因cDNA序列,将cDNA序列编码区连接到原核表达载体pET21b并转化BL21进行原核表达,并使用His-tag纯化试剂盒将目的蛋白进行纯化.[结果]得到cDNA全长序列,含有2 488个碱基,包括一个1 785个碱基的开放阅读框,编码一个含594个氨基酸的蛋白,分子量为67.8 ku,等电点5.38,该序列登录GenBank并获得登录号FJ848784.诱导表达蛋白经SDS-PAGE电泳得到目的蛋白带,纯化结果也获得了目的蛋白带.[结论]获得了一条新的八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并对其在原核表达系统中进行了成功表达和纯化.
[目的]剋隆八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列併進行原覈錶達.[方法]以八字地老虎預蛹期幼蟲為材料提取總RNA,利用RT-PCR和RACE技術剋隆基因cDNA序列,將cDNA序列編碼區連接到原覈錶達載體pET21b併轉化BL21進行原覈錶達,併使用His-tag純化試劑盒將目的蛋白進行純化.[結果]得到cDNA全長序列,含有2 488箇堿基,包括一箇1 785箇堿基的開放閱讀框,編碼一箇含594箇氨基痠的蛋白,分子量為67.8 ku,等電點5.38,該序列登錄GenBank併穫得登錄號FJ848784.誘導錶達蛋白經SDS-PAGE電泳得到目的蛋白帶,純化結果也穫得瞭目的蛋白帶.[結論]穫得瞭一條新的八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列併對其在原覈錶達繫統中進行瞭成功錶達和純化.
[목적]극륭팔자지로호β-N-을선포도당알당감매기인적cDNA서렬병진행원핵표체.[방법]이팔자지로호예용기유충위재료제취총RNA,이용RT-PCR화RACE기술극륭기인cDNA서렬,장cDNA서렬편마구련접도원핵표체재체pET21b병전화BL21진행원핵표체,병사용His-tag순화시제합장목적단백진행순화.[결과]득도cDNA전장서렬,함유2 488개감기,포괄일개1 785개감기적개방열독광,편마일개함594개안기산적단백,분자량위67.8 ku,등전점5.38,해서렬등록GenBank병획득등록호FJ848784.유도표체단백경SDS-PAGE전영득도목적단백대,순화결과야획득료목적단백대.[결론]획득료일조신적팔자지로호β-N-을선포도당알당감매기인적cDNA서렬병대기재원핵표체계통중진행료성공표체화순화.
