CAJ | 학술논문

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.
목적:건립기간단、쾌속、령민、준학적만성을형간염병독랍미부정내약위점적반향선성탐침(reverse line probe,RLP)검측방법.방법:근거HBV야생급내약기인서렬설계통용탐침、3'、5'대칭가유poly-C적특이성탐침화5'표기생물소적확증인물.장탐침선성고정재초산섬유막상,사HBV PCR확증산물여탐침진행잡교.통과우화잡교조건,건립RLP검측방법.이용해방법대중경지구86개만성을간병인진행검측,동시여직접측서결과비교.결과:반소식PCR가대103고패/ml적혈청양본진행유효특이확증,신건적RLP검측방법가대PCR확증산물재1 ng/ml이상,혹혈청양본중돌변형DNA점야생형DNA비례위5％이상적균가유효검측,86례림상적검측령민도위100％,야생형화내약형적검측준학성분별위98.09％(103/105)、100％ (43/43),여직접측서법비,RLP검측야생여내약혼합형준학성경호.결론:반향선성탐침잡교검측방법검측HBV랍미부정내약위점방편、령민、준학,시HBV랍미부정치료유효적감공공구,해방법괄합림상응용.