CAJ | 학술논문

目的在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807- 844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.方法利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807- 844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.结果经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α- 2(840-877)抗血清效价达1∶243000,纯化后抗α-2(840- 877)抗体浓度为7.21 mg/mL.纯化后的抗体在SDS - PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25 kD和50 kD左右.在1 nmol/L～104 nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+变换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用；对Ito和Ik1则均未见明显影响.此外,104 nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用.通过氨基酸序列比对发现,α- 2(807 - 844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7％,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因.结论在1 nmol/L～103 nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+变换体α-2(807- 844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+变换活动；对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响.
목적 재제비화순화항심기Na+/Ca2+교환체α-2(807- 844)태단항체적기출상,관찰항체대대서심기세포Na+/Ca2+교환전류급L형개전류(ICa)、순시외향갑전류(Ito)화내향정류갑전류(Ik1)적영향.방법 이용인공합성적α-2(807-844)다태면역토제비항α-2(807- 844)항체,항혈청경Protein A친화주순화,이용전세포막편겸기술관찰순화후항체대심기세포Na+/Ca2+교환전류(INa/Ca)、L형개전류(ICa)、순시외향갑전류(Ito)화내향정류갑전류(Ik1)적영향.결과 경주동면역,항Na+/Ca2+교환체α- 2(840-877)항혈청효개체1∶243000,순화후항α-2(840- 877)항체농도위7.21 mg/mL.순화후적항체재SDS - PAGE시출현청석적2조대,기분자량분별위25 kD화50 kD좌우.재1 nmol/L～104 nmol/L농도범위내,항α-2항체대성년대서심기세포외향화내향Na+/Ca2+변환전류균표현위제량의뢰성적억제작용；대Ito화Ik1칙균미견명현영향.차외,104 nmol/L해항체대L형개전류역구유억제작용.통과안기산서렬비대발현,α- 2(807 - 844)태단여L형개통도제2결구역공배(697～730위안기산)서렬상사도위23.7％,가능시항체대L형개통도출현교차반응적원인.결론 재1 nmol/L～103 nmol/L농도범위내,항심기Na+/Ca2+변환체α-2(807- 844)항체가특이성억제대서심기Na+/Ca2+변환활동；대L형개통도전류、순시외향갑통도전류화내향정류갑통도전류균미견명현영향.