CAJ | 학술논문

目的表达和纯化带His标记的小鼠线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)融合蛋白,并制备mtTFA的特异性多克隆抗体.方法提取正常BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出无信号肽的mtTFA编码序列,克隆入经Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后的pET14b.酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍离子亲和树脂(Ni2+-NTA His·Bind Resin)纯化融合蛋白.用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.结果成功克隆出了mtTFA的编码序列,并构建了带His标记的小鼠mtTFA融合蛋白的重组表达质粒pET14b/His-mtTFA.表达的融合蛋白经亲和树脂纯化后得到大量的高纯度目的蛋白,获得了高特异性兔抗血清.结论获得了His标记的小鼠mtTFA原核表达载体,纯化得到高纯度的目标蛋白,并制备出高特异性兔抗血清,对进一步研究其生物学功能及调节细胞核同线粒体之间功能协同性的信号通路有重要意义.
목적표체화순화대His표기적소서선립체전록인자A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)융합단백,병제비mtTFA적특이성다극륭항체.방법제취정상BALB/c소서간장조직총RNA,통과RT-PCR방법확증출무신호태적mtTFA편마서렬,극륭입경Kpn Ⅰ화BamH Ⅰ매절후적pET14b.매절급측서감정정학후전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체후용얼리자친화수지(Ni2+-NTA His·Bind Resin)순화융합단백.용순화적단백면역신서란대백토,제비다극륭항체.결과성공극륭출료mtTFA적편마서렬,병구건료대His표기적소서mtTFA융합단백적중조표체질립pET14b/His-mtTFA.표체적융합단백경친화수지순화후득도대량적고순도목적단백,획득료고특이성토항혈청.결론획득료His표기적소서mtTFA원핵표체재체,순화득도고순도적목표단백,병제비출고특이성토항혈청,대진일보연구기생물학공능급조절세포핵동선립체지간공능협동성적신호통로유중요의의.