华南理工大学学报（自然科学版）
華南理工大學學報（自然科學版）
화남리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
11期
105-109
,共5页
向柱方%林影%王小宁%赵树进%韩双艳
嚮柱方%林影%王小寧%趙樹進%韓雙豔
향주방%림영%왕소저%조수진%한쌍염
酿酒酵母%金黄色葡萄球菌蛋白ZZ%免疫荧光染色%流式细胞仪
釀酒酵母%金黃色葡萄毬菌蛋白ZZ%免疫熒光染色%流式細胞儀
양주효모%금황색포도구균단백ZZ%면역형광염색%류식세포의
利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将金黄色葡萄球菌功能蛋白ZZ锚定在酵母表面,并进一步用展示有蛋白ZZ的酵母细胞纯化出兔IgG.以pEZZ18为模板,通过PCR技术克隆了ZZ基因,将ZZ基因通过双酶切连接到穿梭载体pICAS,构建了酵母表面展示载体pICZZ,并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中.核酸电泳结果表明ZZ基因成功整合到了酵母基因组中.重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察表明ZZ蛋白已经展示在酵母细胞表面,流式细胞仪分析结果证实80.4%的酵母细胞表达了ZZ蛋白.利用展示有蛋白ZZ的酵母细胞吸附兔血清中的IgG,洗脱后进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电脉,并进行Western blot免疫印迹,结果表明,此重组酵母细胞纯化的兔IgG比标样兔IgG纯度更高.
利用釀酒酵母錶麵展示繫統,成功地將金黃色葡萄毬菌功能蛋白ZZ錨定在酵母錶麵,併進一步用展示有蛋白ZZ的酵母細胞純化齣兔IgG.以pEZZ18為模闆,通過PCR技術剋隆瞭ZZ基因,將ZZ基因通過雙酶切連接到穿梭載體pICAS,構建瞭酵母錶麵展示載體pICZZ,併將其轉化至釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中.覈痠電泳結果錶明ZZ基因成功整閤到瞭酵母基因組中.重組菌經培養,利用免疫熒光染色方法進行染色,顯微鏡觀察錶明ZZ蛋白已經展示在酵母細胞錶麵,流式細胞儀分析結果證實80.4%的酵母細胞錶達瞭ZZ蛋白.利用展示有蛋白ZZ的酵母細胞吸附兔血清中的IgG,洗脫後進行十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺電脈,併進行Western blot免疫印跡,結果錶明,此重組酵母細胞純化的兔IgG比標樣兔IgG純度更高.
이용양주효모표면전시계통,성공지장금황색포도구균공능단백ZZ묘정재효모표면,병진일보용전시유단백ZZ적효모세포순화출토IgG.이pEZZ18위모판,통과PCR기술극륭료ZZ기인,장ZZ기인통과쌍매절련접도천사재체pICAS,구건료효모표면전시재체pICZZ,병장기전화지양주효모(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1중.핵산전영결과표명ZZ기인성공정합도료효모기인조중.중조균경배양,이용면역형광염색방법진행염색,현미경관찰표명ZZ단백이경전시재효모세포표면,류식세포의분석결과증실80.4%적효모세포표체료ZZ단백.이용전시유단백ZZ적효모세포흡부토혈청중적IgG,세탈후진행십이완기광산납-취병희선알전맥,병진행Western blot면역인적,결과표명,차중조효모세포순화적토IgG비표양토IgG순도경고.
