生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
798-802,837
,共6页
杜济良%赵洪亮%薛冲%任敏%刘志敏
杜濟良%趙洪亮%薛遲%任敏%劉誌敏
두제량%조홍량%설충%임민%류지민
β-(1,3)-葡聚糖酶%信号肽%共翻译转运%巴斯德毕赤酵母
β-(1,3)-葡聚糖酶%信號肽%共翻譯轉運%巴斯德畢赤酵母
β-(1,3)-포취당매%신호태%공번역전운%파사덕필적효모
目的:在胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽的N端添加不同类型的信号肽,研究不同信号肽对其在巴斯德毕赤酵母中表达水平的影响.方法:通过融合PCR方法将α成熟交配因子(MFα)、成熟交配因子Pre肽(αPre)和共翻译转运信号肽(Bip信号肽)等3种信号肽的DNA片段连接至胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽基因的5',利用PCR扩增包含其自身信号肽的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶基因,将上述4种基因片段分别插入pPIC9质粒,再转化巴斯德毕赤酵母GS115宿主菌并诱导表达;测定胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的活性,检测其表达水平.结果:目前在毕赤酵母中已广泛使用的MFα信号肽介导的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶表达水平最高,其次是αPre,Bip信号肽介导的该酶表达水平是酶自身信号肽介导的表达水平的2倍.结论:共转运信号肽能够提高胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的表达水平.
目的:在胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽的N耑添加不同類型的信號肽,研究不同信號肽對其在巴斯德畢赤酵母中錶達水平的影響.方法:通過融閤PCR方法將α成熟交配因子(MFα)、成熟交配因子Pre肽(αPre)和共翻譯轉運信號肽(Bip信號肽)等3種信號肽的DNA片段連接至胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽基因的5',利用PCR擴增包含其自身信號肽的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶基因,將上述4種基因片段分彆插入pPIC9質粒,再轉化巴斯德畢赤酵母GS115宿主菌併誘導錶達;測定胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的活性,檢測其錶達水平.結果:目前在畢赤酵母中已廣汎使用的MFα信號肽介導的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶錶達水平最高,其次是αPre,Bip信號肽介導的該酶錶達水平是酶自身信號肽介導的錶達水平的2倍.結論:共轉運信號肽能夠提高胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的錶達水平.
목적:재포외β-(1,3)-포취당매성숙태적N단첨가불동류형적신호태,연구불동신호태대기재파사덕필적효모중표체수평적영향.방법:통과융합PCR방법장α성숙교배인자(MFα)、성숙교배인자Pre태(αPre)화공번역전운신호태(Bip신호태)등3충신호태적DNA편단련접지포외β-(1,3)-포취당매성숙태기인적5',이용PCR확증포함기자신신호태적포외β-(1,3)-포취당매기인,장상술4충기인편단분별삽입pPIC9질립,재전화파사덕필적효모GS115숙주균병유도표체;측정포외β-(1,3)-포취당매적활성,검측기표체수평.결과:목전재필적효모중이엄범사용적MFα신호태개도적포외β-(1,3)-포취당매표체수평최고,기차시αPre,Bip신호태개도적해매표체수평시매자신신호태개도적표체수평적2배.결론:공전운신호태능구제고포외β-(1,3)-포취당매적표체수평.
