实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2010年
23期
4296-4299
,共4页
陈玲娜%蒋磊%谷杭芝%郑飞云
陳玲娜%蔣磊%穀杭芝%鄭飛雲
진령나%장뢰%곡항지%정비운
慢病毒属%PTEN%Ishikawa细胞
慢病毒屬%PTEN%Ishikawa細胞
만병독속%PTEN%Ishikawa세포
目的:构建PTEN基因重组慢病毒,转染真核细胞Ishikawa并检测PTEN基因在真核细胞内的表达.方法:分子克隆重组人PTEN基因与含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体PLIG,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.将重组子PLIG-PTEN和包装质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,感染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR和western-blot检测PIEN基因在细胞内的表达水平.结果:PCR和测序证实,成功克隆慢病毒载体PLIG-PTEN,包装慢病毒,感染真核细胞Ishikawa后48 h,观察到绿色荧光的广泛表述并检测出宿主细胞内表达的PTENmRNA成功表达PTEN蛋白.结论:本实验成功地构建了人PTEN基因慢病毒载体,并观察到PTEN基因在真核细胞中的成功表达.
目的:構建PTEN基因重組慢病毒,轉染真覈細胞Ishikawa併檢測PTEN基因在真覈細胞內的錶達.方法:分子剋隆重組人PTEN基因與含有CMV啟動子和綠色熒光蛋白(GFP)的慢病毒載體PLIG,PCR篩選暘性剋隆,測序鑒定.將重組子PLIG-PTEN和包裝質粒共轉染包裝細胞293T細胞,包裝產生慢病毒,感染子宮內膜癌細胞株Ishikawa,觀察慢病毒錶達載體所攜帶的GFP基因在細胞內的錶達,使用RT-PCR和western-blot檢測PIEN基因在細胞內的錶達水平.結果:PCR和測序證實,成功剋隆慢病毒載體PLIG-PTEN,包裝慢病毒,感染真覈細胞Ishikawa後48 h,觀察到綠色熒光的廣汎錶述併檢測齣宿主細胞內錶達的PTENmRNA成功錶達PTEN蛋白.結論:本實驗成功地構建瞭人PTEN基因慢病毒載體,併觀察到PTEN基因在真覈細胞中的成功錶達.
목적:구건PTEN기인중조만병독,전염진핵세포Ishikawa병검측PTEN기인재진핵세포내적표체.방법:분자극륭중조인PTEN기인여함유CMV계동자화록색형광단백(GFP)적만병독재체PLIG,PCR사선양성극륭,측서감정.장중조자PLIG-PTEN화포장질립공전염포장세포293T세포,포장산생만병독,감염자궁내막암세포주Ishikawa,관찰만병독표체재체소휴대적GFP기인재세포내적표체,사용RT-PCR화western-blot검측PIEN기인재세포내적표체수평.결과:PCR화측서증실,성공극륭만병독재체PLIG-PTEN,포장만병독,감염진핵세포Ishikawa후48 h,관찰도록색형광적엄범표술병검측출숙주세포내표체적PTENmRNA성공표체PTEN단백.결론:본실험성공지구건료인PTEN기인만병독재체,병관찰도PTEN기인재진핵세포중적성공표체.
