医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2011年
11期
1124-1128
,共5页
周济宏%胡心宝%洪志坚%李幼生%黎介寿
週濟宏%鬍心寶%洪誌堅%李幼生%黎介壽
주제굉%호심보%홍지견%리유생%려개수
肠黏膜上皮细胞株%[3H]-谷氨酰胺%谷氨酰胺载体%ASCT2
腸黏膜上皮細胞株%[3H]-穀氨酰胺%穀氨酰胺載體%ASCT2
장점막상피세포주%[3H]-곡안선알%곡안선알재체%ASCT2
目的 谷氨酰胺( glutamine,GLM)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能.方法 体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3H]-L-GLN摄取率.结果 病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60％,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15％.结论 通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15％以上的作用.
目的 穀氨酰胺( glutamine,GLM)是腸道細胞的主要氧化燃料,必鬚通過載體的轉運纔能進入細胞內,其中載體ASCT2起重要作用,文中將應用RNA榦擾(RNA interference,RNAi)技術研究腸黏膜上皮細胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6細胞膜GLN載體ASCT2的轉運功能.方法 體外培養IEC-6,RNAi慢病毒顆粒進行細胞感染,3d後熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)錶達情況,5d後採用RT-PCR檢測載體ASCT2的mRNA錶達,7d後採用Western blot檢測其蛋白錶達,同時測定[3H]-L-GLN攝取率.結果 病毒轉染細胞中均有GFP錶達,載體ASCT2的mRNA錶達下降60％,蛋白錶達幾近消失,[3H]-L-GLN攝取率下降15％.結論 通過慢病毒載體介導的RNAi這一方便有效的方法,證實瞭ASCT2載體在整箇細胞的GLN轉運中起15％以上的作用.
목적 곡안선알( glutamine,GLM)시장도세포적주요양화연료,필수통과재체적전운재능진입세포내,기중재체ASCT2기중요작용,문중장응용RNA간우(RNA interference,RNAi)기술연구장점막상피세포주(intestinal epithelial cell,IEC)-6세포막GLN재체ASCT2적전운공능.방법 체외배양IEC-6,RNAi만병독과립진행세포감염,3d후형광현미경하관찰록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)표체정황,5d후채용RT-PCR검측재체ASCT2적mRNA표체,7d후채용Western blot검측기단백표체,동시측정[3H]-L-GLN섭취솔.결과 병독전염세포중균유GFP표체,재체ASCT2적mRNA표체하강60％,단백표체궤근소실,[3H]-L-GLN섭취솔하강15％.결론 통과만병독재체개도적RNAi저일방편유효적방법,증실료ASCT2재체재정개세포적GLN전운중기15％이상적작용.
