中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
4期
86-90
,共5页
潮霉素磷酸转移酶基因%pGAPHαA%抗菌肽LL37%毕赤酵母
潮黴素燐痠轉移酶基因%pGAPHαA%抗菌肽LL37%畢赤酵母
조매소린산전이매기인%pGAPHαA%항균태LL37%필적효모
为了实现以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记的质粒在毕赤酵母中高效表达抗菌肽LL37,在pGAPZαA质粒的基础上,通过EcoRV、BamH Ⅰ双酶切将Zeocin抗性基因替换成潮霉素磷酸转移酶基因,获得的表达质粒命名为pGAPHαA.根据LL37氨基酸序列,通过毕赤酵母密码子偏嗜性改造,合成的LL37基因片段克隆到pGAPHαA质粒中,获得重组分泌型表达质粒pGAPHαA-LL37,线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168,经潮霉素B筛选阳性转化子.72 h表达上清LL37蛋白含量约为167 μg/mL,表达产物耐热性好,对大肠杆菌DH5α、猪链球菌最小抑菌浓度分别为2.94、7.06μg/mL.
為瞭實現以潮黴素燐痠轉移酶基因(hpt)為選擇標記的質粒在畢赤酵母中高效錶達抗菌肽LL37,在pGAPZαA質粒的基礎上,通過EcoRV、BamH Ⅰ雙酶切將Zeocin抗性基因替換成潮黴素燐痠轉移酶基因,穫得的錶達質粒命名為pGAPHαA.根據LL37氨基痠序列,通過畢赤酵母密碼子偏嗜性改造,閤成的LL37基因片段剋隆到pGAPHαA質粒中,穫得重組分泌型錶達質粒pGAPHαA-LL37,線性化後電擊轉化畢赤酵母SMD1168,經潮黴素B篩選暘性轉化子.72 h錶達上清LL37蛋白含量約為167 μg/mL,錶達產物耐熱性好,對大腸桿菌DH5α、豬鏈毬菌最小抑菌濃度分彆為2.94、7.06μg/mL.
위료실현이조매소린산전이매기인(hpt)위선택표기적질립재필적효모중고효표체항균태LL37,재pGAPZαA질립적기출상,통과EcoRV、BamH Ⅰ쌍매절장Zeocin항성기인체환성조매소린산전이매기인,획득적표체질립명명위pGAPHαA.근거LL37안기산서렬,통과필적효모밀마자편기성개조,합성적LL37기인편단극륭도pGAPHαA질립중,획득중조분비형표체질립pGAPHαA-LL37,선성화후전격전화필적효모SMD1168,경조매소B사선양성전화자.72 h표체상청LL37단백함량약위167 μg/mL,표체산물내열성호,대대장간균DH5α、저련구균최소억균농도분별위2.94、7.06μg/mL.
