南开大学学报(自然科学版)
南開大學學報(自然科學版)
남개대학학보(자연과학판)
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS NANKAIENSIS
2003年
1期
91-96
,共6页
阳菊华%杨爽%赵丽%罗绍光%张杰%秦刚%朱天慧
暘菊華%楊爽%趙麗%囉紹光%張傑%秦剛%硃天慧
양국화%양상%조려%라소광%장걸%진강%주천혜
骨形态发生蛋白-6%蛋白纯化%大肠杆菌
骨形態髮生蛋白-6%蛋白純化%大腸桿菌
골형태발생단백-6%단백순화%대장간균
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protem,BMP)-6属于转化生长因子(transforming growthfac-t.)-β超基因家族,在骨的形成中具有重要作用,并受雌激素选择性上调.本研究利用RT-PCR从人胎盘组织中扩增BMP-6成熟肽的DNA片段,克隆到pGEX-5X-1中,构建GST-BMP6融合蛋白表达载体pGEX-BMP-6,转化E.coli DH5a.克隆质粒转化的工程菌,经IPTG诱导4h后,高效表达GST-BMP6融合蛋白,在SDS-PAGE上出现一新蛋白带,分子量约为42kD,约占总蛋白的25%,表达产物以包涵体形式存在.菌体超声破碎,经0.3%N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体,离心后的上清液加入0.6%Triton X-100螯合SKL.然后利用谷胱甘肽Sepharose-4B亲和层析纯化.结合GST-BMP6的介质经洗涤、Xa因子酶切得到纯度达95%的rhBMP-6蛋白.
骨形態髮生蛋白(bone morphogenetic protem,BMP)-6屬于轉化生長因子(transforming growthfac-t.)-β超基因傢族,在骨的形成中具有重要作用,併受雌激素選擇性上調.本研究利用RT-PCR從人胎盤組織中擴增BMP-6成熟肽的DNA片段,剋隆到pGEX-5X-1中,構建GST-BMP6融閤蛋白錶達載體pGEX-BMP-6,轉化E.coli DH5a.剋隆質粒轉化的工程菌,經IPTG誘導4h後,高效錶達GST-BMP6融閤蛋白,在SDS-PAGE上齣現一新蛋白帶,分子量約為42kD,約佔總蛋白的25%,錶達產物以包涵體形式存在.菌體超聲破碎,經0.3%N-十二烷基肌氨痠鈉(SKL)溶解包涵體,離心後的上清液加入0.6%Triton X-100螯閤SKL.然後利用穀胱甘肽Sepharose-4B親和層析純化.結閤GST-BMP6的介質經洗滌、Xa因子酶切得到純度達95%的rhBMP-6蛋白.
골형태발생단백(bone morphogenetic protem,BMP)-6속우전화생장인자(transforming growthfac-t.)-β초기인가족,재골적형성중구유중요작용,병수자격소선택성상조.본연구이용RT-PCR종인태반조직중확증BMP-6성숙태적DNA편단,극륭도pGEX-5X-1중,구건GST-BMP6융합단백표체재체pGEX-BMP-6,전화E.coli DH5a.극륭질립전화적공정균,경IPTG유도4h후,고효표체GST-BMP6융합단백,재SDS-PAGE상출현일신단백대,분자량약위42kD,약점총단백적25%,표체산물이포함체형식존재.균체초성파쇄,경0.3%N-십이완기기안산납(SKL)용해포함체,리심후적상청액가입0.6%Triton X-100오합SKL.연후이용곡광감태Sepharose-4B친화층석순화.결합GST-BMP6적개질경세조、Xa인자매절득도순도체95%적rhBMP-6단백.
