生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
5期
811-815
,共5页
融合蛋白%肠激酶%复性%包涵体
融閤蛋白%腸激酶%複性%包涵體
융합단백%장격매%복성%포함체
大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,主要以包涵体形式存在.包涵体经4mol/L尿素和0.5% Triton X-100洗涤,以6mol/L盐酸胍、100mmol/LDTT溶解,在胱氨酸存在下,以脉冲加样方式复性.融合蛋白复性在6mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/mL和复性终蛋白浓度0.3mg/mL为最佳复性方案.复性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切.经IDA-Sepharose及Q-Sepharose纯化,rEKL纯度可达95%以上,可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA.实现了大规模生产rEKL,每升发酵液经复性及纯化后,可得rEKL60mg/L以上,使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实.
大腸桿菌高密度髮酵錶達腸激酶輕鏈融閤蛋白DsbA-rEKL,主要以包涵體形式存在.包涵體經4mol/L尿素和0.5% Triton X-100洗滌,以6mol/L鹽痠胍、100mmol/LDTT溶解,在胱氨痠存在下,以脈遲加樣方式複性.融閤蛋白複性在6mmol/L胱氨痠存在下、脈遲加量0.03mg/mL和複性終蛋白濃度0.3mg/mL為最佳複性方案.複性的融閤蛋白加2mmol/L CaCL2後快速自切.經IDA-Sepharose及Q-Sepharose純化,rEKL純度可達95%以上,可高效酶切重組瑞特普酶融閤蛋白Trx-rPA.實現瞭大規模生產rEKL,每升髮酵液經複性及純化後,可得rEKL60mg/L以上,使以融閤蛋白錶達rPA等藥用蛋白成為現實.
대장간균고밀도발효표체장격매경련융합단백DsbA-rEKL,주요이포함체형식존재.포함체경4mol/L뇨소화0.5% Triton X-100세조,이6mol/L염산고、100mmol/LDTT용해,재광안산존재하,이맥충가양방식복성.융합단백복성재6mmol/L광안산존재하、맥충가량0.03mg/mL화복성종단백농도0.3mg/mL위최가복성방안.복성적융합단백가2mmol/L CaCL2후쾌속자절.경IDA-Sepharose급Q-Sepharose순화,rEKL순도가체95%이상,가고효매절중조서특보매융합단백Trx-rPA.실현료대규모생산rEKL,매승발효액경복성급순화후,가득rEKL60mg/L이상,사이융합단백표체rPA등약용단백성위현실.
