CAJ | 학술논문

目的:用基因工程方法改造成纤维细胞,使其分泌血管内皮细胞生长因子,观察成纤维细胞作为基因转染的靶细胞的可行性.方法:实验于2005-11在解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成.PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒的扩增、提取、纯化和鉴定后,将培养14 d细胞融合约80%的小鼠NIH3T3细胞在24孔板中进行转染,细胞随机分为3组,每组10孔,分别为PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组.采用免疫组织化学化学检测血管内皮细胞生长因子表达.ELISA方法检测血管内皮细胞生长因子外分泌.四甲基偶氮唑盐法检测小鼠NIH3T3细胞对PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染的敏感性.结果:①PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒的基因测序结果显示序列正确.②免疫组织化学染色显示:小鼠NIH3T3细胞转染4 d后胞浆内可观察到阳性表达产物,对照组呈阴性结果.③ELISA检测结果:小鼠NIH3T3细胞转染14 d后,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组3组培养上清中血管内皮细胞生长因子浓度分别346±23,0,0 ng/L(P＜0.05).④四甲基偶氮唑盐法检测结果:PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组、空质粒转染组和不转染质粒组所测的490 nm的A值比较差异均无显著性(依次为0.96±0.11,0.91±0.10,0.98±0.16,P＞0.05).PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染对小鼠NIH3T3细胞增殖无影响.结论:小鼠NIH3T3细胞可作为血管内皮细胞生长因子基因转染的靶细胞,用于基因治疗.
목적:용기인공정방법개조성섬유세포,사기분비혈관내피세포생장인자,관찰성섬유세포작위기인전염적파세포적가행성.방법:실험우2005-11재해방군제사군의대학서경의원전군정형외과연구소완성.PcDNA3.1(-)/VEGF165질립적확증、제취、순화화감정후,장배양14 d세포융합약80%적소서NIH3T3세포재24공판중진행전염,세포수궤분위3조,매조10공,분별위PcDNA3.1(-)/VEGF165질립전염조、공질립전염조화불전염질립조.채용면역조직화학화학검측혈관내피세포생장인자표체.ELISA방법검측혈관내피세포생장인자외분비.사갑기우담서염법검측소서NIH3T3세포대PcDNA3.1(-)/VEGF165질립전염적민감성.결과:①PcDNA3.1(-)/VEGF165질립적기인측서결과현시서렬정학.②면역조직화학염색현시:소서NIH3T3세포전염4 d후포장내가관찰도양성표체산물,대조조정음성결과.③ELISA검측결과:소서NIH3T3세포전염14 d후,PcDNA3.1(-)/VEGF165질립전염조、공질립전염조화불전염질립조3조배양상청중혈관내피세포생장인자농도분별346±23,0,0 ng/L(P＜0.05).④사갑기우담서염법검측결과:PcDNA3.1(-)/VEGF165질립전염조、공질립전염조화불전염질립조소측적490 nm적A치비교차이균무현저성(의차위0.96±0.11,0.91±0.10,0.98±0.16,P＞0.05).PcDNA3.1(-)/VEGF165질립전염대소서NIH3T3세포증식무영향.결론:소서NIH3T3세포가작위혈관내피세포생장인자기인전염적파세포,용우기인치료.