病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2008年
3期
178-184
,共7页
李启明%马学军%高寒春%周蕊%匡治州%侯云德
李啟明%馬學軍%高寒春%週蕊%劻治州%侯雲德
리계명%마학군%고한춘%주예%광치주%후운덕
H5N1亚型禽流感病毒%逆转录环介导等温核酸扩增技术%实时监控
H5N1亞型禽流感病毒%逆轉錄環介導等溫覈痠擴增技術%實時鑑控
H5N1아형금류감병독%역전록배개도등온핵산확증기술%실시감공
建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测.该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应.对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT-LAMP检测,并以SYBR Green Ⅰ为反应指示剂进行了逆转录环介导等温核酸扩增技术,对该反应进行实时监控,经对扩增产物做内切酶验证和测序分析,证明RT-LAMP技术的特异性;同时,用10倍系列稀释的RNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试.结果显示:利用RT-LAMP技术成功检测到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因区,且RT-LAMP与Real-time PCR结果呈现很好的一致性.此方法的灵敏度可达到能检测10个拷贝RNA分子水平.因此,RT-LAMP技术应用于H5N1亚型禽流感病毒的快速检测是一种可行的方法.
建立一種便捷、靈敏的檢測方法,即逆轉錄環介導等溫覈痠擴增技術(RT-LAMP)用于H5N1亞型禽流感病毒基因檢測.該技術使用特異對應于靶序列中8箇基因區段的6條特異引物,在等溫條件下進行覈痠擴增反應.對51份實驗感染動物及病毒培養標本的H5N1亞型禽流感病毒的HA、NA基因區進行瞭RT-LAMP檢測,併以SYBR Green Ⅰ為反應指示劑進行瞭逆轉錄環介導等溫覈痠擴增技術,對該反應進行實時鑑控,經對擴增產物做內切酶驗證和測序分析,證明RT-LAMP技術的特異性;同時,用10倍繫列稀釋的RNA樣品對該檢測方法的靈敏度進行瞭測試.結果顯示:利用RT-LAMP技術成功檢測到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因區,且RT-LAMP與Real-time PCR結果呈現很好的一緻性.此方法的靈敏度可達到能檢測10箇拷貝RNA分子水平.因此,RT-LAMP技術應用于H5N1亞型禽流感病毒的快速檢測是一種可行的方法.
건립일충편첩、령민적검측방법,즉역전록배개도등온핵산확증기술(RT-LAMP)용우H5N1아형금류감병독기인검측.해기술사용특이대응우파서렬중8개기인구단적6조특이인물,재등온조건하진행핵산확증반응.대51빈실험감염동물급병독배양표본적H5N1아형금류감병독적HA、NA기인구진행료RT-LAMP검측,병이SYBR Green Ⅰ위반응지시제진행료역전록배개도등온핵산확증기술,대해반응진행실시감공,경대확증산물주내절매험증화측서분석,증명RT-LAMP기술적특이성;동시,용10배계렬희석적RNA양품대해검측방법적령민도진행료측시.결과현시:이용RT-LAMP기술성공검측도H5N1금류감병독적HA、NA기인구,차RT-LAMP여Real-time PCR결과정현흔호적일치성.차방법적령민도가체도능검측10개고패RNA분자수평.인차,RT-LAMP기술응용우H5N1아형금류감병독적쾌속검측시일충가행적방법.
