微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2008年
4期
195-199
,共5页
赵静静%徐胜凤%王虹军%沈洪波%王洪海
趙靜靜%徐勝鳳%王虹軍%瀋洪波%王洪海
조정정%서성봉%왕홍군%침홍파%왕홍해
结核分枝杆菌%色氨酸合成酶%α亚基%同源模建
結覈分枝桿菌%色氨痠閤成酶%α亞基%同源模建
결핵분지간균%색안산합성매%α아기%동원모건
目的 克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析.方法 以结核分枝杆菌(简称结核杆菌)H37Rv基因组为模板,扩增trpA基因,构建pET30a-trpA重组质粒;转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基(His-rMtTrpA).十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱分析测定相对分子质量(Mr)后,用圆二色光谱(CD)分析和同源模建方法检测二级和三级结构.研究不同浓度His-rMtTrpA对β亚基酶活反应的影响.结果 成功克隆了813 bp的目的 基因trpA,并获得了高纯度的His-rMtTrpA蛋白.重组蛋白Mr为33.151×103(含载体蛋白).25℃时His-rMtTrpA的二级结构包括31.8%α螺旋、31.8%β折叠、8.4%β转角和27.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)8桶状结构.酶学性质研究表明,在His-rMtTrpA与MtTrpB的摩尔比为2.2时,色氨酸合成酶α亚基可以最大限度促进β亚基酶活反应.结论 成功得到高纯度的重组目的 蛋白His-rMtTrpA,其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础.
目的 剋隆錶達色氨痠閤成酶α亞基編碼基因併對其進行功能分析.方法 以結覈分枝桿菌(簡稱結覈桿菌)H37Rv基因組為模闆,擴增trpA基因,構建pET30a-trpA重組質粒;轉化重組質粒到大腸埃希菌DH5α併在BL21(DE3)誘導錶達,純化可溶性的結覈桿菌重組色氨痠閤成酶α亞基(His-rMtTrpA).十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和質譜分析測定相對分子質量(Mr)後,用圓二色光譜(CD)分析和同源模建方法檢測二級和三級結構.研究不同濃度His-rMtTrpA對β亞基酶活反應的影響.結果 成功剋隆瞭813 bp的目的 基因trpA,併穫得瞭高純度的His-rMtTrpA蛋白.重組蛋白Mr為33.151×103(含載體蛋白).25℃時His-rMtTrpA的二級結構包括31.8%α螺鏇、31.8%β摺疊、8.4%β轉角和27.9%無規則捲麯,它的三維模型顯示為(β/α)8桶狀結構.酶學性質研究錶明,在His-rMtTrpA與MtTrpB的摩爾比為2.2時,色氨痠閤成酶α亞基可以最大限度促進β亞基酶活反應.結論 成功得到高純度的重組目的 蛋白His-rMtTrpA,其功能分析為針對色氨痠閤成酶的藥物篩選設計提供理論基礎.
목적 극륭표체색안산합성매α아기편마기인병대기진행공능분석.방법 이결핵분지간균(간칭결핵간균)H37Rv기인조위모판,확증trpA기인,구건pET30a-trpA중조질립;전화중조질립도대장애희균DH5α병재BL21(DE3)유도표체,순화가용성적결핵간균중조색안산합성매α아기(His-rMtTrpA).십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화질보분석측정상대분자질량(Mr)후,용원이색광보(CD)분석화동원모건방법검측이급화삼급결구.연구불동농도His-rMtTrpA대β아기매활반응적영향.결과 성공극륭료813 bp적목적 기인trpA,병획득료고순도적His-rMtTrpA단백.중조단백Mr위33.151×103(함재체단백).25℃시His-rMtTrpA적이급결구포괄31.8%α라선、31.8%β절첩、8.4%β전각화27.9%무규칙권곡,타적삼유모형현시위(β/α)8통상결구.매학성질연구표명,재His-rMtTrpA여MtTrpB적마이비위2.2시,색안산합성매α아기가이최대한도촉진β아기매활반응.결론 성공득도고순도적중조목적 단백His-rMtTrpA,기공능분석위침대색안산합성매적약물사선설계제공이론기출.
