生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
5期
587-591
,共5页
王丰%马家烈%李惠明%陈霞芳%王煜非%黄倩
王豐%馬傢烈%李惠明%陳霞芳%王煜非%黃倩
왕봉%마가렬%리혜명%진하방%왕욱비%황천
E2F1%shRNA%视网膜母细胞瘤
E2F1%shRNA%視網膜母細胞瘤
E2F1%shRNA%시망막모세포류
视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中由于Rb基因缺失或失活,转录调控因子E2F1始终处于活化状态,细胞不断增殖,E2F1活性增加是恶性肿瘤的普遍现象.根据人E2F1基因设计了3段shRNA,构建RNA干扰表达载体pSilencer-shE2F1,瞬时转染人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb-44和人肝癌细胞株SMMC-7721,通过荧光定量PCR检测E2F1表达水平的变化,PI(碘化丙锭)染色检测细胞周期各时相细胞数量以检测其对细胞周期的影响.根据筛选出的有效shRNA序列构建腺病毒载体并包装出腺病毒Ad-shE2F1,在裸鼠前房模型中,体外按50 moi的感染系数感染稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人视网膜母细胞瘤细胞株48h后,收集细胞,将2×10<'5>细胞注射到裸鼠眼前房内,连续观察眼内肿瘤细胞生长情况并拍照记录.通过转染肿瘤细胞株检测E2F1转录水平,筛选到1个能明显抑制肿瘤细胞内E2F1表达的shRNA序列,并使细胞周期中S期细胞数减少.经Ad-shE2F1感染的RB肿瘤细胞与对照相比较,其在裸鼠眼前房内肿瘤生长减缓.结果说明,有效抑制hE2F1表达的shRNA具有抑制体内外人视网膜母细胞瘤生长的作用.
視網膜母細胞瘤(retinoblastoma,RB)中由于Rb基因缺失或失活,轉錄調控因子E2F1始終處于活化狀態,細胞不斷增殖,E2F1活性增加是噁性腫瘤的普遍現象.根據人E2F1基因設計瞭3段shRNA,構建RNA榦擾錶達載體pSilencer-shE2F1,瞬時轉染人視網膜母細胞瘤細胞株HXO-Rb-44和人肝癌細胞株SMMC-7721,通過熒光定量PCR檢測E2F1錶達水平的變化,PI(碘化丙錠)染色檢測細胞週期各時相細胞數量以檢測其對細胞週期的影響.根據篩選齣的有效shRNA序列構建腺病毒載體併包裝齣腺病毒Ad-shE2F1,在裸鼠前房模型中,體外按50 moi的感染繫數感染穩定錶達綠色熒光蛋白(GFP)的人視網膜母細胞瘤細胞株48h後,收集細胞,將2×10<'5>細胞註射到裸鼠眼前房內,連續觀察眼內腫瘤細胞生長情況併拍照記錄.通過轉染腫瘤細胞株檢測E2F1轉錄水平,篩選到1箇能明顯抑製腫瘤細胞內E2F1錶達的shRNA序列,併使細胞週期中S期細胞數減少.經Ad-shE2F1感染的RB腫瘤細胞與對照相比較,其在裸鼠眼前房內腫瘤生長減緩.結果說明,有效抑製hE2F1錶達的shRNA具有抑製體內外人視網膜母細胞瘤生長的作用.
시망막모세포류(retinoblastoma,RB)중유우Rb기인결실혹실활,전록조공인자E2F1시종처우활화상태,세포불단증식,E2F1활성증가시악성종류적보편현상.근거인E2F1기인설계료3단shRNA,구건RNA간우표체재체pSilencer-shE2F1,순시전염인시망막모세포류세포주HXO-Rb-44화인간암세포주SMMC-7721,통과형광정량PCR검측E2F1표체수평적변화,PI(전화병정)염색검측세포주기각시상세포수량이검측기대세포주기적영향.근거사선출적유효shRNA서렬구건선병독재체병포장출선병독Ad-shE2F1,재라서전방모형중,체외안50 moi적감염계수감염은정표체록색형광단백(GFP)적인시망막모세포류세포주48h후,수집세포,장2×10<'5>세포주사도라서안전방내,련속관찰안내종류세포생장정황병박조기록.통과전염종류세포주검측E2F1전록수평,사선도1개능명현억제종류세포내E2F1표체적shRNA서렬,병사세포주기중S기세포수감소.경Ad-shE2F1감염적RB종류세포여대조상비교,기재라서안전방내종류생장감완.결과설명,유효억제hE2F1표체적shRNA구유억제체내외인시망막모세포류생장적작용.
