口腔医学
口腔醫學
구강의학
STOMATOLOGY
2011年
4期
193-195,198
,共4页
董辉%林杨%王雷%韩培辉%刘名燕%李永明
董輝%林楊%王雷%韓培輝%劉名燕%李永明
동휘%림양%왕뢰%한배휘%류명연%리영명
蛋白质磷酸酶-1(PP-1)%成骨细胞%转染%信号转导通路
蛋白質燐痠酶-1(PP-1)%成骨細胞%轉染%信號轉導通路
단백질린산매-1(PP-1)%성골세포%전염%신호전도통로
目的 建立稳定高表达蛋白质磷酸酶-1(protein phasphatase-1,PP-1)的MC3T3-E1成骨样细胞系.方法 采用RT-PCR技术从MC3T3-E1细胞中扩增蛋白质磷酸酶-1(PP-1)基因,将获得的基因定向插入pCI-neo真核表达质粒中,PCR及双酶切鉴定后用脂质体将表达载体转染入MC3T3-E1细胞,经G418加压有限稀释筛选,建立稳定高表达PP-1的MC3T3-E1成骨样细胞系,采用Western blot法检测PP-1的蛋白表达情况.结果 PCR及双酶切鉴定表明表达载体pCI-neo-PP-1构建正确;Western blot检测结果显示PP-1蛋白能在转染pCI-neo-PP-1的MC3T3-E1细胞中稳定高表达.结论 成功建立了稳定高表达PP-1的MC3T3-E1成骨样细胞系,为进一步深入研究PP-1在细胞力学信号转导通路中的功能及作用机制奠定了实验基础.
目的 建立穩定高錶達蛋白質燐痠酶-1(protein phasphatase-1,PP-1)的MC3T3-E1成骨樣細胞繫.方法 採用RT-PCR技術從MC3T3-E1細胞中擴增蛋白質燐痠酶-1(PP-1)基因,將穫得的基因定嚮插入pCI-neo真覈錶達質粒中,PCR及雙酶切鑒定後用脂質體將錶達載體轉染入MC3T3-E1細胞,經G418加壓有限稀釋篩選,建立穩定高錶達PP-1的MC3T3-E1成骨樣細胞繫,採用Western blot法檢測PP-1的蛋白錶達情況.結果 PCR及雙酶切鑒定錶明錶達載體pCI-neo-PP-1構建正確;Western blot檢測結果顯示PP-1蛋白能在轉染pCI-neo-PP-1的MC3T3-E1細胞中穩定高錶達.結論 成功建立瞭穩定高錶達PP-1的MC3T3-E1成骨樣細胞繫,為進一步深入研究PP-1在細胞力學信號轉導通路中的功能及作用機製奠定瞭實驗基礎.
목적 건립은정고표체단백질린산매-1(protein phasphatase-1,PP-1)적MC3T3-E1성골양세포계.방법 채용RT-PCR기술종MC3T3-E1세포중확증단백질린산매-1(PP-1)기인,장획득적기인정향삽입pCI-neo진핵표체질립중,PCR급쌍매절감정후용지질체장표체재체전염입MC3T3-E1세포,경G418가압유한희석사선,건립은정고표체PP-1적MC3T3-E1성골양세포계,채용Western blot법검측PP-1적단백표체정황.결과 PCR급쌍매절감정표명표체재체pCI-neo-PP-1구건정학;Western blot검측결과현시PP-1단백능재전염pCI-neo-PP-1적MC3T3-E1세포중은정고표체.결론 성공건립료은정고표체PP-1적MC3T3-E1성골양세포계,위진일보심입연구PP-1재세포역학신호전도통로중적공능급작용궤제전정료실험기출.
