医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
5期
377-381
,共5页
蔡雪飞%龚旭阳%杜茜%胡接力%张文露%胡源%黄爱龙%汤华
蔡雪飛%龔旭暘%杜茜%鬍接力%張文露%鬍源%黃愛龍%湯華
채설비%공욱양%두천%호접력%장문로%호원%황애룡%탕화
HBx蛋白%原核表达%GST蛋白
HBx蛋白%原覈錶達%GST蛋白
HBx단백%원핵표체%GST단백
目的 在对乙型肝炎病毒非结构蛋白HBx研究的过程中,发现体外表达HBx蛋白产物的稳定性存在差异.为了了解其中的原因,拟通过原核表达方式进行分析.方法 以包含全长HBV DNA的质粒pEco63为模板,通过PCR反应,扩增HBV X基因全长序列(1～154氨基酸)和截短序列(48～104氨基酸,48～146氨基酸,98～146氨基酸),将这几种不同长度和位置的HBX DNA序列克隆到pGEX4T-2原核表达载体中,并通过下游引物设计中引入6×组氨酸标签序列.结果 最终成功构建N端融合GST蛋白标签序列和C端融合6×组氨酸标签序列的4种HBx重组表达载体.将4种包含不同长度HBx的重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,培养至菌液浓度A值大约0.6左右,加入终浓度0.1 mmol/L的IPTG进行诱导表达.提取全菌蛋白通过Western印迹对HBx各重组蛋白产物的N端和C端进行检测.结论 在分段表达的HBx重组蛋白中发生了多处局部的断裂,而断裂部位主要集中于GST蛋白上.而造成这一结果的原因可能与HBx蛋白功能区域暴露后与GST相互作用有关.
目的 在對乙型肝炎病毒非結構蛋白HBx研究的過程中,髮現體外錶達HBx蛋白產物的穩定性存在差異.為瞭瞭解其中的原因,擬通過原覈錶達方式進行分析.方法 以包含全長HBV DNA的質粒pEco63為模闆,通過PCR反應,擴增HBV X基因全長序列(1～154氨基痠)和截短序列(48～104氨基痠,48～146氨基痠,98～146氨基痠),將這幾種不同長度和位置的HBX DNA序列剋隆到pGEX4T-2原覈錶達載體中,併通過下遊引物設計中引入6×組氨痠標籤序列.結果 最終成功構建N耑融閤GST蛋白標籤序列和C耑融閤6×組氨痠標籤序列的4種HBx重組錶達載體.將4種包含不同長度HBx的重組質粒轉化大腸埃希菌Rosetta,培養至菌液濃度A值大約0.6左右,加入終濃度0.1 mmol/L的IPTG進行誘導錶達.提取全菌蛋白通過Western印跡對HBx各重組蛋白產物的N耑和C耑進行檢測.結論 在分段錶達的HBx重組蛋白中髮生瞭多處跼部的斷裂,而斷裂部位主要集中于GST蛋白上.而造成這一結果的原因可能與HBx蛋白功能區域暴露後與GST相互作用有關.
목적 재대을형간염병독비결구단백HBx연구적과정중,발현체외표체HBx단백산물적은정성존재차이.위료료해기중적원인,의통과원핵표체방식진행분석.방법 이포함전장HBV DNA적질립pEco63위모판,통과PCR반응,확증HBV X기인전장서렬(1～154안기산)화절단서렬(48～104안기산,48～146안기산,98～146안기산),장저궤충불동장도화위치적HBX DNA서렬극륭도pGEX4T-2원핵표체재체중,병통과하유인물설계중인입6×조안산표첨서렬.결과 최종성공구건N단융합GST단백표첨서렬화C단융합6×조안산표첨서렬적4충HBx중조표체재체.장4충포함불동장도HBx적중조질립전화대장애희균Rosetta,배양지균액농도A치대약0.6좌우,가입종농도0.1 mmol/L적IPTG진행유도표체.제취전균단백통과Western인적대HBx각중조단백산물적N단화C단진행검측.결론 재분단표체적HBx중조단백중발생료다처국부적단렬,이단렬부위주요집중우GST단백상.이조성저일결과적원인가능여HBx단백공능구역폭로후여GST상호작용유관.
