暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2012年
5期
468-472,476
,共6页
王旭曼%苏建华%朱雄军%谢春芳%刘大岭
王旭曼%囌建華%硃雄軍%謝春芳%劉大嶺
왕욱만%소건화%주웅군%사춘방%류대령
有机相%共价固定化%酶蛋白构象
有機相%共價固定化%酶蛋白構象
유궤상%공개고정화%매단백구상
蛋白质共价固定时,容易发生由于共价化学反应而引起蛋白质构象的不可逆变化而造成蛋白活性丧失的现象,该问题在诸如药物修饰、蛋白质芯片、酶生物电极等制备中十分重要.本研究以壳聚糖为载体,以胰蛋白酶为研究对象,比较了水相与多种有机相条件下的共价固定化酶的动力学特性.结果发现,固定化酶特征常数Km值:所有的有机相条件下共价固定的胰蛋白酶均优于传统的水相中共价固定的该酶,且更接近于游离酶的Km值(水相中固定的胰蛋白酶其Km是1,4-二氧六环中固定的胰蛋白酶的3.69倍),提示有机相中固定的胰蛋白酶比水相中固定的该酶更接近于酶的天然构象；与水相中共价固定的胰蛋白酶相比,所有有机相中共价固定的胰蛋白酶均获得了更高的转换数Kcat(乙酸乙酯中固定的胰蛋白酶其转换数Kcat是水相中固定的该酶的58.64倍),即有机相中共价固定的胰蛋白酶均显示出比传统的水相中共价固定的该酶更高的催化效率.本研究表明,利用酶蛋白在有机相中变得刚硬的特性,在有机相中对某些酶进行共价固定化修饰有利于维持酶蛋白天然构象,一定程度上能够克服传统水相中进行共价固定化过程中造成的酶变性失活现象.
蛋白質共價固定時,容易髮生由于共價化學反應而引起蛋白質構象的不可逆變化而造成蛋白活性喪失的現象,該問題在諸如藥物脩飾、蛋白質芯片、酶生物電極等製備中十分重要.本研究以殼聚糖為載體,以胰蛋白酶為研究對象,比較瞭水相與多種有機相條件下的共價固定化酶的動力學特性.結果髮現,固定化酶特徵常數Km值:所有的有機相條件下共價固定的胰蛋白酶均優于傳統的水相中共價固定的該酶,且更接近于遊離酶的Km值(水相中固定的胰蛋白酶其Km是1,4-二氧六環中固定的胰蛋白酶的3.69倍),提示有機相中固定的胰蛋白酶比水相中固定的該酶更接近于酶的天然構象；與水相中共價固定的胰蛋白酶相比,所有有機相中共價固定的胰蛋白酶均穫得瞭更高的轉換數Kcat(乙痠乙酯中固定的胰蛋白酶其轉換數Kcat是水相中固定的該酶的58.64倍),即有機相中共價固定的胰蛋白酶均顯示齣比傳統的水相中共價固定的該酶更高的催化效率.本研究錶明,利用酶蛋白在有機相中變得剛硬的特性,在有機相中對某些酶進行共價固定化脩飾有利于維持酶蛋白天然構象,一定程度上能夠剋服傳統水相中進行共價固定化過程中造成的酶變性失活現象.
단백질공개고정시,용역발생유우공개화학반응이인기단백질구상적불가역변화이조성단백활성상실적현상,해문제재제여약물수식、단백질심편、매생물전겁등제비중십분중요.본연구이각취당위재체,이이단백매위연구대상,비교료수상여다충유궤상조건하적공개고정화매적동역학특성.결과발현,고정화매특정상수Km치:소유적유궤상조건하공개고정적이단백매균우우전통적수상중공개고정적해매,차경접근우유리매적Km치(수상중고정적이단백매기Km시1,4-이양륙배중고정적이단백매적3.69배),제시유궤상중고정적이단백매비수상중고정적해매경접근우매적천연구상；여수상중공개고정적이단백매상비,소유유궤상중공개고정적이단백매균획득료경고적전환수Kcat(을산을지중고정적이단백매기전환수Kcat시수상중고정적해매적58.64배),즉유궤상중공개고정적이단백매균현시출비전통적수상중공개고정적해매경고적최화효솔.본연구표명,이용매단백재유궤상중변득강경적특성,재유궤상중대모사매진행공개고정화수식유리우유지매단백천연구상,일정정도상능구극복전통수상중진행공개고정화과정중조성적매변성실활현상.
