生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2004年
4期
323-325
,共3页
李慧艳%潘欣%靳宝峰%满江红%叶棋浓%张学敏
李慧豔%潘訢%靳寶峰%滿江紅%葉棋濃%張學敏
리혜염%반흔%근보봉%만강홍%협기농%장학민
syntenin基因%PDZ%融合表达%纯化
syntenin基因%PDZ%融閤錶達%純化
syntenin기인%PDZ%융합표체%순화
肿瘤相关基因syntenin在乳腺癌的转移和浸润过程中发挥重要作用.syntenin基因编码蛋白的C端有2个串联的PDZ(PDZ1和PDZ2)结构域,它们与该蛋白的功能密切相关.PDZ结构域存在于多种蛋白质中.用PCR方法扩增了syntenin全长、N端(△PDZ)、串联重复的PDZ(2PDZ)、PDZ1和PDZ2结构域编码序列,并将其以正确相位与pGEX-2T载体中的GST序列编码融合,构建成重组质粒pGST-syntenin、pGST-△PDZ、pGST-2PDZ、pGST-PDZ1和pGST-PDZ2.将这些重组质粒分别转化E.coli DH5α后,分别表达了相应的GST融合蛋白.Western blot检测结果表明,2种融合蛋白均能与GST抗体反应.表达的GST融合蛋白经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白,为PDZ结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料.
腫瘤相關基因syntenin在乳腺癌的轉移和浸潤過程中髮揮重要作用.syntenin基因編碼蛋白的C耑有2箇串聯的PDZ(PDZ1和PDZ2)結構域,它們與該蛋白的功能密切相關.PDZ結構域存在于多種蛋白質中.用PCR方法擴增瞭syntenin全長、N耑(△PDZ)、串聯重複的PDZ(2PDZ)、PDZ1和PDZ2結構域編碼序列,併將其以正確相位與pGEX-2T載體中的GST序列編碼融閤,構建成重組質粒pGST-syntenin、pGST-△PDZ、pGST-2PDZ、pGST-PDZ1和pGST-PDZ2.將這些重組質粒分彆轉化E.coli DH5α後,分彆錶達瞭相應的GST融閤蛋白.Western blot檢測結果錶明,2種融閤蛋白均能與GST抗體反應.錶達的GST融閤蛋白經穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析穫得瞭純化的融閤蛋白,為PDZ結構域及其相關蛋白功能研究提供瞭有用的材料.
종류상관기인syntenin재유선암적전이화침윤과정중발휘중요작용.syntenin기인편마단백적C단유2개천련적PDZ(PDZ1화PDZ2)결구역,타문여해단백적공능밀절상관.PDZ결구역존재우다충단백질중.용PCR방법확증료syntenin전장、N단(△PDZ)、천련중복적PDZ(2PDZ)、PDZ1화PDZ2결구역편마서렬,병장기이정학상위여pGEX-2T재체중적GST서렬편마융합,구건성중조질립pGST-syntenin、pGST-△PDZ、pGST-2PDZ、pGST-PDZ1화pGST-PDZ2.장저사중조질립분별전화E.coli DH5α후,분별표체료상응적GST융합단백.Western blot검측결과표명,2충융합단백균능여GST항체반응.표체적GST융합단백경곡광감태-Sepharose 4B친화층석획득료순화적융합단백,위PDZ결구역급기상관단백공능연구제공료유용적재료.
