军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2005年
6期
516-519,522
,共5页
甘慧%周勇%孙萍%王嘉军%刘敏霞%高明%孙红琰%王全立
甘慧%週勇%孫萍%王嘉軍%劉敏霞%高明%孫紅琰%王全立
감혜%주용%손평%왕가군%류민하%고명%손홍염%왕전립
绿色荧光蛋白%CB融合基因%重组蛋白质类%真核细胞%基因表达%共聚焦%转染
綠色熒光蛋白%CB融閤基因%重組蛋白質類%真覈細胞%基因錶達%共聚焦%轉染
록색형광단백%CB융합기인%중조단백질류%진핵세포%기인표체%공취초%전염
目的:构建以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-N1-CB,转染体外培养的COS-7细胞,以观察CB重组蛋白在真核细胞中的表达及定位.方法:PCR方法扩增得到去除终止密码的CB融合基因序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-N1-CB.脂质体法转染体外培养的COS-7细胞后,以RT-PCR和Western印迹方法验证其mRNA及蛋白的表达,并在活细胞状态下用荧光显微镜、激光共聚焦显微成像技术直接观察CB-GFP融合蛋白在细胞中的分布和定位.结果:RT-PCR及Western印迹结果均证明CB-GFP融合基因表达载体pEGFP-N1-CB在COS-7细胞中获得了表达.荧光显微镜观察显示,在空载体pEGFP-N1转染组中,COS-7细胞内荧光呈弥散分布;重组质粒pEGFP-N1-CB转染组中,绿色荧光主要聚集在细胞浆中.结论:CB融合基因能在真核细胞COS-7中得到高效表达,且蛋白表达主要定位于细胞浆中,本试验为CB重组蛋白的提取及进一步功能研究奠定了基础.
目的:構建以綠色熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)為報告基因的重組錶達質粒pEGFP-N1-CB,轉染體外培養的COS-7細胞,以觀察CB重組蛋白在真覈細胞中的錶達及定位.方法:PCR方法擴增得到去除終止密碼的CB融閤基因序列,剋隆入真覈錶達載體pEGFP-N1中,構建重組錶達載體pEGFP-N1-CB.脂質體法轉染體外培養的COS-7細胞後,以RT-PCR和Western印跡方法驗證其mRNA及蛋白的錶達,併在活細胞狀態下用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微成像技術直接觀察CB-GFP融閤蛋白在細胞中的分佈和定位.結果:RT-PCR及Western印跡結果均證明CB-GFP融閤基因錶達載體pEGFP-N1-CB在COS-7細胞中穫得瞭錶達.熒光顯微鏡觀察顯示,在空載體pEGFP-N1轉染組中,COS-7細胞內熒光呈瀰散分佈;重組質粒pEGFP-N1-CB轉染組中,綠色熒光主要聚集在細胞漿中.結論:CB融閤基因能在真覈細胞COS-7中得到高效錶達,且蛋白錶達主要定位于細胞漿中,本試驗為CB重組蛋白的提取及進一步功能研究奠定瞭基礎.
목적:구건이록색형광단백(green fluorescent protein, GFP)위보고기인적중조표체질립pEGFP-N1-CB,전염체외배양적COS-7세포,이관찰CB중조단백재진핵세포중적표체급정위.방법:PCR방법확증득도거제종지밀마적CB융합기인서렬,극륭입진핵표체재체pEGFP-N1중,구건중조표체재체pEGFP-N1-CB.지질체법전염체외배양적COS-7세포후,이RT-PCR화Western인적방법험증기mRNA급단백적표체,병재활세포상태하용형광현미경、격광공취초현미성상기술직접관찰CB-GFP융합단백재세포중적분포화정위.결과:RT-PCR급Western인적결과균증명CB-GFP융합기인표체재체pEGFP-N1-CB재COS-7세포중획득료표체.형광현미경관찰현시,재공재체pEGFP-N1전염조중,COS-7세포내형광정미산분포;중조질립pEGFP-N1-CB전염조중,록색형광주요취집재세포장중.결론:CB융합기인능재진핵세포COS-7중득도고효표체,차단백표체주요정위우세포장중,본시험위CB중조단백적제취급진일보공능연구전정료기출.
