生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2006年
5期
716-718
,共3页
徐刚%罗满林%王洪波%杜华茂%黄伟
徐剛%囉滿林%王洪波%杜華茂%黃偉
서강%라만림%왕홍파%두화무%황위
猪源肠出血性大肠杆菌%fedA基因%克隆%表达%猪水肿病
豬源腸齣血性大腸桿菌%fedA基因%剋隆%錶達%豬水腫病
저원장출혈성대장간균%fedA기인%극륭%표체%저수종병
目的:获得重庆猪源肠出血性大肠杆菌(EHEC)强毒株CD18株fedA基因表达产物.方法:根据GenBank中的fedA基因序列设计引物,从重庆猪源EHEC强毒株CD18株基因组中经PCR扩增目的片段,克隆到pUC19质粒,亚克隆到表达载体pET28b(+)的SalⅠ-HindⅢ位点后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni柱法纯化,SDS-PAGE及Western印迹检验表达产物.结果:CD18株fedA与文献报道的fedA的序列同源性为99.3%,推导的氨基酸序列的同源性为98.7%,表达产物在50～100 mmol/L咪唑洗脱时出峰,SDS-PAGE显示其相对分子质量20 000,Western印迹证明该蛋白条带能与分子标记蛋白His6抗体发生特异反应.结论:克隆到猪源EHEC CD18株fedA基因,并在大肠杆菌中得到表达.
目的:穫得重慶豬源腸齣血性大腸桿菌(EHEC)彊毒株CD18株fedA基因錶達產物.方法:根據GenBank中的fedA基因序列設計引物,從重慶豬源EHEC彊毒株CD18株基因組中經PCR擴增目的片段,剋隆到pUC19質粒,亞剋隆到錶達載體pET28b(+)的SalⅠ-HindⅢ位點後轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,Ni柱法純化,SDS-PAGE及Western印跡檢驗錶達產物.結果:CD18株fedA與文獻報道的fedA的序列同源性為99.3%,推導的氨基痠序列的同源性為98.7%,錶達產物在50～100 mmol/L咪唑洗脫時齣峰,SDS-PAGE顯示其相對分子質量20 000,Western印跡證明該蛋白條帶能與分子標記蛋白His6抗體髮生特異反應.結論:剋隆到豬源EHEC CD18株fedA基因,併在大腸桿菌中得到錶達.
목적:획득중경저원장출혈성대장간균(EHEC)강독주CD18주fedA기인표체산물.방법:근거GenBank중적fedA기인서렬설계인물,종중경저원EHEC강독주CD18주기인조중경PCR확증목적편단,극륭도pUC19질립,아극륭도표체재체pET28b(+)적SalⅠ-HindⅢ위점후전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체,Ni주법순화,SDS-PAGE급Western인적검험표체산물.결과:CD18주fedA여문헌보도적fedA적서렬동원성위99.3%,추도적안기산서렬적동원성위98.7%,표체산물재50～100 mmol/L미서세탈시출봉,SDS-PAGE현시기상대분자질량20 000,Western인적증명해단백조대능여분자표기단백His6항체발생특이반응.결론:극륭도저원EHEC CD18주fedA기인,병재대장간균중득도표체.
