CAJ | 학술논문

背景:疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用.研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC Ⅰ类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应.目的:构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:pcDNA3.1(-)Vector为BD公司产品,pINCY/MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存.方法:设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定.主要观察指标:真核表达载体pcDNA3.1(-)IMAGE-3+HSP70的鉴定.结果:测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致,人热休克蛋白70有3处同义突变.结论:成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体.
배경:역묘유도적항종류CD8+T세포반응피인위재증가궤체대종류저항력방면기중요작용.연구발현,항원체정세포섭취열휴극단백70여종류상관항원적융합단백,병재MHC Ⅰ류분자상처리제정유차열휴극단백위반려적태후,회계동CD8+세포독성T림파세포반응.목적:구건흑색소류항원3(MAGE-3)、인열휴극단백70(HSP70)융합기인적진핵표체재체.설계、시간급지점:단일양본관찰,우2008-06/12재국가위생부납미생물기술중점실험실완성.재료:pcDNA3.1(-)Vector위BD공사산품,pINCY/MAGE-3,pOTB7/HSP70위Open Biosystems공사산품,DH5α유납미생물기술중점실험실보존.방법:설계함Xho Ⅰ매절위점MAGE-3인물급함Kpn Ⅰ매절위점인열휴극단백70인물,이pINCY/MAGE-3화pOTB7/HSP70위모판확증흑색소류항원3화인열휴극단백70기인편단,이기인편단위모판,채용MAGE-3상유인물(함Xho Ⅰ매절위점)급인열휴극단백70하유인물(함Kpn Ⅰ매절위점),PCR확증MAGE-3-HSP70융합기인편단,Kpn Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절병련접지pcDNA3.1(-),전화감수태대장간균DH5α,획득양성극륭진행쌍매절화측서감정.주요관찰지표:진핵표체재체pcDNA3.1(-)IMAGE-3+HSP70적감정.결과:측서결과현시흑색소류항원3여Gene Bank상공포적서렬완전일치,인열휴극단백70유3처동의돌변.결론:성공구건MAGE-3-HSP70융합기인진핵표체재체.