CAJ | 학술논문

已有研究证实,B细胞淋巴瘤病人自身免疫球蛋白独特型可视为肿瘤特异性抗原用于独特型疫苗.为探究带有细胞因子的融合型独特型肿瘤疫苗是否会提高免疫效果,制备小鼠B细胞型淋巴瘤细胞的独特型单链可变区片段,与免疫佐剂单核细胞趋化因子MCP3融合,同时融合报告基因EGFP,构建融合型独特型淋巴瘤DNA疫苗.用RT-PCR法扩增BALB/c小鼠源B细胞淋巴瘤细胞株A20的Ig VH和Ig VL基因,重组PCR法将编码(Gly4Ser)3的核苷酸片段连接两基因,制备scFv片段.用相同PCR方法,选用1段编码NDAQAPKS连接肽连接趋化因子MCP3基因与scFv片段.获得MCP3-scFv融合基因片段.将scFv和MCP3-scFv融合基因片段分别插入真核表达质粒pTARGET,并在融合基因的下游插入报告基因EGFP,构建真核表达质粒pTARGET/seFv-EGFP和pTARGET/McP3-scFv-EGFP.结果表明,成功扩增A20细胞的lg VH和Ig VL基因片段及scFv-EGFP、MCP3-scFv-EGFP融合基因片段;酶切鉴定表明,成功制备重组真核表达质粒pTARGET/scFv-EGFP和pTARGET/MCP3-scFv-EGFP.结论:成功构建带有鼠源scFv片段、趋化因子MCP3和EGFP融合的独特型抗B细胞淋巴瘤疫苗表达质粒pTARGET/McP3-scFv-EGFP和pTARGET/scFv-EGFP.所构建的重组表达质粒为下一步的抗B细胞淋巴瘤基因疫苗的体内动物实验奠定了基础.
이유연구증실,B세포림파류병인자신면역구단백독특형가시위종류특이성항원용우독특형역묘.위탐구대유세포인자적융합형독특형종류역묘시부회제고면역효과,제비소서B세포형림파류세포적독특형단련가변구편단,여면역좌제단핵세포추화인자MCP3융합,동시융합보고기인EGFP,구건융합형독특형림파류DNA역묘.용RT-PCR법확증BALB/c소서원B세포림파류세포주A20적Ig VH화Ig VL기인,중조PCR법장편마(Gly4Ser)3적핵감산편단련접량기인,제비scFv편단.용상동PCR방법,선용1단편마NDAQAPKS련접태련접추화인자MCP3기인여scFv편단.획득MCP3-scFv융합기인편단.장scFv화MCP3-scFv융합기인편단분별삽입진핵표체질립pTARGET,병재융합기인적하유삽입보고기인EGFP,구건진핵표체질립pTARGET/seFv-EGFP화pTARGET/McP3-scFv-EGFP.결과표명,성공확증A20세포적lg VH화Ig VL기인편단급scFv-EGFP、MCP3-scFv-EGFP융합기인편단;매절감정표명,성공제비중조진핵표체질립pTARGET/scFv-EGFP화pTARGET/MCP3-scFv-EGFP.결론:성공구건대유서원scFv편단、추화인자MCP3화EGFP융합적독특형항B세포림파류역묘표체질립pTARGET/McP3-scFv-EGFP화pTARGET/scFv-EGFP.소구건적중조표체질립위하일보적항B세포림파류기인역묘적체내동물실험전정료기출.