重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
6期
816-818
,共3页
pcDNA3.1%内参基因%转染%转录%表达
pcDNA3.1%內參基因%轉染%轉錄%錶達
pcDNA3.1%내삼기인%전염%전록%표체
目的:研究转染质粒pcDNA3.1对内参基因表达影响差别,为今后在采用pcDNA3.1载体进行表达分析时内参基因的选择提供参考.方法:选用HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY共5种细胞转染pcDNA3.1空载体质粒,转染后48 h提取细胞总RNA荧光定量PCR法比较内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase,GAPDH)、肌动蛋白(β-actin)、18sRNA表达水平差异,提取细胞总蛋白,检测GAPDH、β-actin表达水平差异.结果:5种细胞在转染质粒pcDNA3.1后,内参基因转录和蛋白表达均出现不同程度的下降,其中以β-actin下降最为明显,GAPDH及18sRNA在转录水平下降幅度小,且下降程度接近.结论:pcDNA3.1质粒转染造成基因表达非特异性抑制,其中对管家基因β-actin影响较大,因此在应用pcDNA3.1来源载体进行基因功能分析时,不推荐使用β-actin作为内参基因.
目的:研究轉染質粒pcDNA3.1對內參基因錶達影響差彆,為今後在採用pcDNA3.1載體進行錶達分析時內參基因的選擇提供參攷.方法:選用HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY共5種細胞轉染pcDNA3.1空載體質粒,轉染後48 h提取細胞總RNA熒光定量PCR法比較內參基因甘油醛-3-燐痠脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase,GAPDH)、肌動蛋白(β-actin)、18sRNA錶達水平差異,提取細胞總蛋白,檢測GAPDH、β-actin錶達水平差異.結果:5種細胞在轉染質粒pcDNA3.1後,內參基因轉錄和蛋白錶達均齣現不同程度的下降,其中以β-actin下降最為明顯,GAPDH及18sRNA在轉錄水平下降幅度小,且下降程度接近.結論:pcDNA3.1質粒轉染造成基因錶達非特異性抑製,其中對管傢基因β-actin影響較大,因此在應用pcDNA3.1來源載體進行基因功能分析時,不推薦使用β-actin作為內參基因.
목적:연구전염질립pcDNA3.1대내삼기인표체영향차별,위금후재채용pcDNA3.1재체진행표체분석시내삼기인적선택제공삼고.방법:선용HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY공5충세포전염pcDNA3.1공재체질립,전염후48 h제취세포총RNA형광정량PCR법비교내삼기인감유철-3-린산탈경매(Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase,GAPDH)、기동단백(β-actin)、18sRNA표체수평차이,제취세포총단백,검측GAPDH、β-actin표체수평차이.결과:5충세포재전염질립pcDNA3.1후,내삼기인전록화단백표체균출현불동정도적하강,기중이β-actin하강최위명현,GAPDH급18sRNA재전록수평하강폭도소,차하강정도접근.결론:pcDNA3.1질립전염조성기인표체비특이성억제,기중대관가기인β-actin영향교대,인차재응용pcDNA3.1래원재체진행기인공능분석시,불추천사용β-actin작위내삼기인.
