华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
2011年
1期
55-59
,共5页
王刚%刘成硅%张晓明%张凯伦%蒋雄刚
王剛%劉成硅%張曉明%張凱倫%蔣雄剛
왕강%류성규%장효명%장개륜%장웅강
人血管内皮细胞生长因子165%人组织型纤溶酶原激活因子%真核表达载体%体外表达
人血管內皮細胞生長因子165%人組織型纖溶酶原激活因子%真覈錶達載體%體外錶達
인혈관내피세포생장인자165%인조직형섬용매원격활인자%진핵표체재체%체외표체
目的 构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况.方法 将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达.结果 成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P＜0.01).结论 成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础.
目的 構建人血管內皮細胞生長因子165(VEGF165)和人組織型纖溶酶原激活因子(tPA)雙基因的新型真覈錶達載體pIRES-VEGF165-tPA,併通過轉染人臍靜脈內皮細胞繫EA.hy926細胞,驗證載體的體外錶達情況.方法 將目的基因片段VEGF165和tPA插入到真覈錶達載體pIRES質粒中,體外瞬時轉染人臍靜脈內皮細胞繫EA.hy926細胞,通過實時熒光定量RT-PCR和Western blot分彆檢測mRNA和蛋白水平的錶達.結果 成功構建pIRES-VEGF165-tPA雙基因真覈錶達載體,測序結果與預期相符;熒光計數顯示體外瞬時轉染人臍靜脈內皮細胞繫EA.hy926細胞的轉染效率約為(15.6±3.1)%;實時熒光定量RT-PCR和Western blot證實轉染pIRES-VEGF165-tPA質粒組細胞在mRNA和蛋白水平的錶達均高于各對照組(均P＜0.01).結論 成功構建pIRES-VEGF165-tPA雙基因真覈錶達載體,併且實現其在人臍靜脈內皮細胞繫EA.hy926細胞中的錶達,為進一步探索其在機械瓣膜抗凝方麵的作用奠定瞭基礎.
목적 구건인혈관내피세포생장인자165(VEGF165)화인조직형섬용매원격활인자(tPA)쌍기인적신형진핵표체재체pIRES-VEGF165-tPA,병통과전염인제정맥내피세포계EA.hy926세포,험증재체적체외표체정황.방법 장목적기인편단VEGF165화tPA삽입도진핵표체재체pIRES질립중,체외순시전염인제정맥내피세포계EA.hy926세포,통과실시형광정량RT-PCR화Western blot분별검측mRNA화단백수평적표체.결과 성공구건pIRES-VEGF165-tPA쌍기인진핵표체재체,측서결과여예기상부;형광계수현시체외순시전염인제정맥내피세포계EA.hy926세포적전염효솔약위(15.6±3.1)%;실시형광정량RT-PCR화Western blot증실전염pIRES-VEGF165-tPA질립조세포재mRNA화단백수평적표체균고우각대조조(균P＜0.01).결론 성공구건pIRES-VEGF165-tPA쌍기인진핵표체재체,병차실현기재인제정맥내피세포계EA.hy926세포중적표체,위진일보탐색기재궤계판막항응방면적작용전정료기출.
