中外医疗
中外醫療
중외의료
CHINA FOREIGN MEDICAL TREATMENT
2011年
9期
1-3
,共3页
唐海燕%沈晓丽%林立芳%韩莉莉
唐海燕%瀋曉麗%林立芳%韓莉莉
당해연%침효려%림립방%한리리
Oct4%Sox2%c-Myc%Klf4%慢病毒载体
Oct4%Sox2%c-Myc%Klf4%慢病毒載體
Oct4%Sox2%c-Myc%Klf4%만병독재체
目的 构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒表达载体,为诱导性多能干细胞研究奠定基础.方法 将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因利用Infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,经PCR和测序后与与结构质粒pHelper1.0和包膜质粒pHeiper2.0在脂质体Lipofeetamine2000介导下共转染293T细胞包装生产慢病毒,浓缩纯化后检测滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的慢病毒载体并包装慢病毒,检测Oct4基因重组慢病毒、Sox2基因重组慢病毒、c-Myc基因重组慢病毒的滴度均为1×109TU/mL,Klf4基因重组慢病毒的滴度为1.9×109 TU/mL.结论 成功建立重组慢病毒载体的三质拉包装细胞系统.
目的 構建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒錶達載體,為誘導性多能榦細胞研究奠定基礎.方法 將Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因利用Infusion技術重組構建慢病毒載體穿梭質粒pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,經PCR和測序後與與結構質粒pHelper1.0和包膜質粒pHeiper2.0在脂質體Lipofeetamine2000介導下共轉染293T細胞包裝生產慢病毒,濃縮純化後檢測滴度.結果 PCR擴增和測序結果證實成功構建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的慢病毒載體併包裝慢病毒,檢測Oct4基因重組慢病毒、Sox2基因重組慢病毒、c-Myc基因重組慢病毒的滴度均為1×109TU/mL,Klf4基因重組慢病毒的滴度為1.9×109 TU/mL.結論 成功建立重組慢病毒載體的三質拉包裝細胞繫統.
목적 구건Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4기인만병독표체재체,위유도성다능간세포연구전정기출.방법 장Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4기인이용Infusion기술중조구건만병독재체천사질립pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,경PCR화측서후여여결구질립pHelper1.0화포막질립pHeiper2.0재지질체Lipofeetamine2000개도하공전염293T세포포장생산만병독,농축순화후검측적도.결과 PCR확증화측서결과증실성공구건Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4적만병독재체병포장만병독,검측Oct4기인중조만병독、Sox2기인중조만병독、c-Myc기인중조만병독적적도균위1×109TU/mL,Klf4기인중조만병독적적도위1.9×109 TU/mL.결론 성공건립중조만병독재체적삼질랍포장세포계통.
