河北联合大学学报（医学版）
河北聯閤大學學報（醫學版）
하북연합대학학보（의학판）
JOURNAL OF NORTH CHINA COAL MEDICAL UNIVERSITY
2012年
3期
306-308
,共3页
颜宇琦%王梅梅%熊亚南%章广玲
顏宇琦%王梅梅%熊亞南%章廣玲
안우기%왕매매%웅아남%장엄령
质粒%miR-210%基因%表达
質粒%miR-210%基因%錶達
질립%miR-210%기인%표체
①目的 构建miR-210的过表达载体,为进一步研究miR-210的功能奠定良好的实验基础.②方法 首先设计并合成miR-210前体序列的PCR引物,以HEK293细胞的基因组为模板,PCR扩增包含有miR-210前体的序列,大小为440bp;PCR产物经过EcoRI和BglⅡ酶切后,与线性化的pcDNA3.1(+)载体连接后,转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48小时后,提取小RNA,Northern blot检测miR-210的表达水平.③结果 纯化质粒的相对分子质量为5.9kb,酶切鉴定结果符合目的 条带(440bp)大小,插入的寡核苷酸序列NCBI Genbank提供序列完全相符,Northern Blot检测到的miR-210成熟体大小为21碱基大小.④结论 成功构建了miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210,为进一步研究miR-210的功能奠定良好的实验基础.
①目的 構建miR-210的過錶達載體,為進一步研究miR-210的功能奠定良好的實驗基礎.②方法 首先設計併閤成miR-210前體序列的PCR引物,以HEK293細胞的基因組為模闆,PCR擴增包含有miR-210前體的序列,大小為440bp;PCR產物經過EcoRI和BglⅡ酶切後,與線性化的pcDNA3.1(+)載體連接後,轉化大腸桿菌,擴增、純化穫得所需質粒,以瓊脂糖凝膠電泳、酶切鑒定以及基因測序鑒定其分子質量和插入片段的序列;構建的質粒轉染HEK293細胞48小時後,提取小RNA,Northern blot檢測miR-210的錶達水平.③結果 純化質粒的相對分子質量為5.9kb,酶切鑒定結果符閤目的 條帶(440bp)大小,插入的寡覈苷痠序列NCBI Genbank提供序列完全相符,Northern Blot檢測到的miR-210成熟體大小為21堿基大小.④結論 成功構建瞭miR-210的過錶達質粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210,為進一步研究miR-210的功能奠定良好的實驗基礎.
①목적 구건miR-210적과표체재체,위진일보연구miR-210적공능전정량호적실험기출.②방법 수선설계병합성miR-210전체서렬적PCR인물,이HEK293세포적기인조위모판,PCR확증포함유miR-210전체적서렬,대소위440bp;PCR산물경과EcoRI화BglⅡ매절후,여선성화적pcDNA3.1(+)재체련접후,전화대장간균,확증、순화획득소수질립,이경지당응효전영、매절감정이급기인측서감정기분자질량화삽입편단적서렬;구건적질립전염HEK293세포48소시후,제취소RNA,Northern blot검측miR-210적표체수평.③결과 순화질립적상대분자질량위5.9kb,매절감정결과부합목적 조대(440bp)대소,삽입적과핵감산서렬NCBI Genbank제공서렬완전상부,Northern Blot검측도적miR-210성숙체대소위21감기대소.④결론 성공구건료miR-210적과표체질립pcDNA3.1(+)/pri-miR-210,위진일보연구miR-210적공능전정량호적실험기출.
