徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2012年
9期
564-568
,共5页
李连涛%张宝福%李慧忠%郑骏年
李連濤%張寶福%李慧忠%鄭駿年
리련도%장보복%리혜충%정준년
肾癌%溶瘤腺病毒%GAPDH基因%短发夹RNA
腎癌%溶瘤腺病毒%GAPDH基因%短髮夾RNA
신암%용류선병독%GAPDH기인%단발협RNA
目的 研究荷载管家基因GAPDH shRNA的溶瘤腺病毒(TD-GAPDH)对人肾癌细胞OSRC增殖抑制的作用.方法 病毒TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞、人肾小管上皮细胞HK-2.Western blot法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测GAPDH的mRNA、蛋白的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;结晶紫染色法检测细胞毒作用.结果 TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染的OSRC细胞均表达E1A,HK-2细胞均不表达;抑制OSRC细胞GAPDH表达作用依次为TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞的凋亡率(%)依次为(48.0±3.17)、(32.3±6.68)、(23.6±5.43),各组之间差异均有统计学意义(P<0.05);用10MOI TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞,4天后存活率(%)依次为:(26.1±2.98)、(47.2±3.10)、(61.2±2.52)、PBS(100),各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);病毒对OSRC细胞的毒性作用依次为TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.结论 TD-GAPDH能在肾癌OSRC细胞复制,具有显著的抑制肾癌OSRC细胞GAPDH基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用.为溶瘤腺病毒进一步荷载癌基因的shRNA奠定基础.
目的 研究荷載管傢基因GAPDH shRNA的溶瘤腺病毒(TD-GAPDH)對人腎癌細胞OSRC增殖抑製的作用.方法 病毒TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC細胞、人腎小管上皮細胞HK-2.Western blot法檢測E1A錶達;逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)、Western blot法分彆檢測GAPDH的mRNA、蛋白的錶達;原位末耑標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡;MTT法檢測細胞增殖;結晶紫染色法檢測細胞毒作用.結果 TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染的OSRC細胞均錶達E1A,HK-2細胞均不錶達;抑製OSRC細胞GAPDH錶達作用依次為TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC細胞的凋亡率(%)依次為(48.0±3.17)、(32.3±6.68)、(23.6±5.43),各組之間差異均有統計學意義(P<0.05);用10MOI TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC細胞,4天後存活率(%)依次為:(26.1±2.98)、(47.2±3.10)、(61.2±2.52)、PBS(100),各組間比較差異均有統計學意義(P<0.05);病毒對OSRC細胞的毒性作用依次為TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.結論 TD-GAPDH能在腎癌OSRC細胞複製,具有顯著的抑製腎癌OSRC細胞GAPDH基因錶達、誘導凋亡、殺傷腎癌細胞作用.為溶瘤腺病毒進一步荷載癌基因的shRNA奠定基礎.
목적 연구하재관가기인GAPDH shRNA적용류선병독(TD-GAPDH)대인신암세포OSRC증식억제적작용.방법 병독TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP감염OSRC세포、인신소관상피세포HK-2.Western blot법검측E1A표체;역전록-취합매련반응(RT-PCR)、Western blot법분별검측GAPDH적mRNA、단백적표체;원위말단표기법(TUNEL)검측세포조망;MTT법검측세포증식;결정자염색법검측세포독작용.결과 TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP감염적OSRC세포균표체E1A,HK-2세포균불표체;억제OSRC세포GAPDH표체작용의차위TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP감염OSRC세포적조망솔(%)의차위(48.0±3.17)、(32.3±6.68)、(23.6±5.43),각조지간차이균유통계학의의(P<0.05);용10MOI TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP감염OSRC세포,4천후존활솔(%)의차위:(26.1±2.98)、(47.2±3.10)、(61.2±2.52)、PBS(100),각조간비교차이균유통계학의의(P<0.05);병독대OSRC세포적독성작용의차위TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP.결론 TD-GAPDH능재신암OSRC세포복제,구유현저적억제신암OSRC세포GAPDH기인표체、유도조망、살상신암세포작용.위용류선병독진일보하재암기인적shRNA전정기출.
