CAJ | 학술논문

目的研究人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide synthase traffic inducer, NOSTRIN)基因在体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)中的过度表达对该细胞生物学特性的影响.方法脂质体介导转染体外培养的HUVEC,G418筛选阳性克隆.免疫组织化学法检测第八因子相关抗原(FⅧRag)的表达;细胞计数法绘制细胞生长曲线以观察细胞的增殖能力;Western 印迹检测细胞中NOSTRIN和eNOS蛋白质的表达;分光光度法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养上清中eNOS的活性和NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)水平;光镜、电镜观察细胞的形态和超微结构.结果转染前后细胞均为血管内皮来源细胞;转染NOSTRIN基因后细胞的增殖能力明显降低;Western印迹显示细胞转染NOSTRIN基因后其表达量明显增高,而eNOS蛋白质的表达量在各组细胞之间无差异(P＞0.05);转染NOSTRIN的细胞培养上清中eNOS活性[(11.727±3.09) U/ml]与转染空载体细胞[(22.69±3.36) U/ml]和对照组细胞[(21.85±3.47) U/ml]比较降低显著(P＜0.01),同时转染NOSTRIN细胞培养上清中 NO2-/NO3-[(25.56±2.49) μmol/L],与转染空载体细胞[(48.37±2.61) μmol/L]和对照组[(49.06±2.78) μmol/L]比较显著降低(P＜0.01);光镜和电镜观察看到转染NOSTRIN后对HUVEC有损伤作用(HUVEC拉长、微绒毛变短、细胞膜损伤,胞浆内有脂滴空泡,核膜不完整).结论 NOSTRIN的高表达影响了HUVEC的生物学特性,对HUVEC有明显的损伤作用.
목적 연구인내피형일양화담합매운수개도물(endothelial nitric oxide synthase traffic inducer, NOSTRIN)기인재체외배양적인제정맥내피세포(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)중적과도표체대해세포생물학특성적영향.방법 지질체개도전염체외배양적HUVEC,G418사선양성극륭.면역조직화학법검측제팔인자상관항원(FⅧRag)적표체;세포계수법회제세포생장곡선이관찰세포적증식능력;Western 인적검측세포중NOSTRIN화eNOS단백질적표체;분광광도법화초산환원매법분별측정세포배양상청중eNOS적활성화NO대사산물아초산기/아초기(NO2-/NO3-)수평;광경、전경관찰세포적형태화초미결구.결과 전염전후세포균위혈관내피래원세포;전염NOSTRIN기인후세포적증식능력명현강저;Western인적현시세포전염NOSTRIN기인후기표체량명현증고,이eNOS단백질적표체량재각조세포지간무차이(P＞0.05);전염NOSTRIN적세포배양상청중eNOS활성[(11.727±3.09) U/ml]여전염공재체세포[(22.69±3.36) U/ml]화대조조세포[(21.85±3.47) U/ml]비교강저현저(P＜0.01),동시전염NOSTRIN세포배양상청중 NO2-/NO3-[(25.56±2.49) μmol/L],여전염공재체세포[(48.37±2.61) μmol/L]화대조조[(49.06±2.78) μmol/L]비교현저강저(P＜0.01);광경화전경관찰간도전염NOSTRIN후대HUVEC유손상작용(HUVEC랍장、미융모변단、세포막손상,포장내유지적공포,핵막불완정).결론 NOSTRIN적고표체영향료HUVEC적생물학특성,대HUVEC유명현적손상작용.