CAJ | 학술논문

专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌缺乏EMP、ED途径以及三羧酸循环的关键酶(如磷酸果糖激酶等),不能氧化有机物获得能量.本文利用PCR技术扩增E. coli K-12 磷酸果糖激酶-1基因(pfkA),将该基因与广泛寄主的IncQ质粒pJRD215连接构建重组质粒pSDK-1,该质粒可与pfk基因缺陷株E. coli DF1010互补.通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌Tt-7中并得到表达.pSDK-1在宿主Tt-7中有较好的稳定性,在无选择压力条件下连续传50代仍可保留75%.酶活性测定表明,pSDK-1的pfkA基因在缺陷株E. coli DF1010中表达水平[(96.6±0.66) U/g 蛋白]略高于原始菌株E. coli K-12 [(85.9±1.12) U/g 蛋白];而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达[(12.4±0.73) U/g 蛋白],并且其表达水平不受培养基中葡萄糖的影响.实验表明,在无机盐培养基中加入葡萄糖时,含质粒pSDK-1的氧化硫硫杆菌Tt-7可利用培养基中的葡萄糖而加快生长,而对照菌株的生长则未受明显影响;但是重组菌利用葡萄糖的速度较缓慢. 图5 表2 参16
전성자양겁단기산성양화류류간균결핍EMP、ED도경이급삼최산순배적관건매(여린산과당격매등),불능양화유궤물획득능량.본문이용PCR기술확증E. coli K-12 린산과당격매-1기인(pfkA),장해기인여엄범기주적IncQ질립pJRD215련접구건중조질립pSDK-1,해질립가여pfk기인결함주E. coli DF1010호보.통과접합전이적방식장기도입양화류류간균Tt-7중병득도표체.pSDK-1재숙주Tt-7중유교호적은정성,재무선택압력조건하련속전50대잉가보류75%.매활성측정표명,pSDK-1적pfkA기인재결함주E. coli DF1010중표체수평[(96.6±0.66) U/g 단백]략고우원시균주E. coli K-12 [(85.9±1.12) U/g 단백];이재양화류류간균중칙이교저수평진행표체[(12.4±0.73) U/g 단백],병차기표체수평불수배양기중포도당적영향.실험표명,재무궤염배양기중가입포도당시,함질립pSDK-1적양화류류간균Tt-7가이용배양기중적포도당이가쾌생장,이대조균주적생장칙미수명현영향;단시중조균이용포도당적속도교완만. 도5 표2 삼16