CAJ | 학술논문

在维生素C的发酵生产过程中,普通生酮基古龙酸菌S2(Ketogulonigenium vulgare)能产生醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为VC的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).通过超声波破碎菌体、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,Q Sepharose High Performance柱层析等过程,从普通生酮基古龙酸菌S2发酵液中分离纯化了醇醛脱氢酶,并用该纯化酶免疫新西兰兔制备出了合格抗血清.同时,普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA经Sau3AⅠ部分酶切后,与黏粒载体pKC505连接,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建了基因组文库.最后应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)从12 000个克隆子中筛选得到一个阳性克隆K719#.通过检测该基因工程菌的活性,表明K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中获得了高效表达,这为简化VC的生产工艺奠定了基础.
재유생소C적발효생산과정중,보통생동기고룡산균S2(Ketogulonigenium vulgare)능산생순철탈경매,장L-산리당전화위VC적전체2-동기-L-고룡산(2-KLG).통과초성파파쇄균체、류산안분급침정、DEAE Sepharose Fast Flow음리자교환층석,Q Sepharose High Performance주층석등과정,종보통생동기고룡산균S2발효액중분리순화료순철탈경매,병용해순화매면역신서란토제비출료합격항혈청.동시,보통생동기고룡산균S2기인조DNA경Sau3AⅠ부분매절후,여점립재체pKC505련접,용포장단백진행포장,전염대장간균DH5α,구건료기인조문고.최후응용면역매반점기술(Dot-ELISA)종12 000개극륭자중사선득도일개양성극륭K719#.통과검측해기인공정균적활성,표명K719#구유사L-산리당전화위2-KLG적공능,종이사순철탈경매재대장간균중획득료고효표체,저위간화VC적생산공예전정료기출.