中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2008年
2期
196-201
,共6页
张琮%王乃佐%陈辉%周光峰%张国安%韩斌
張琮%王迺佐%陳輝%週光峰%張國安%韓斌
장종%왕내좌%진휘%주광봉%장국안%한빈
组织工程皮肤%表皮干细胞%成纤维细胞%创面愈合
組織工程皮膚%錶皮榦細胞%成纖維細胞%創麵愈閤
조직공정피부%표피간세포%성섬유세포%창면유합
目的 探索由人表皮干细胞、成纤维细胞与纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性. 方法 将人全层皮肤采用胰蛋白酶消化法使表皮干细胞和真皮成纤维细胞分离后,分别在无血清培养基中行原代及传代培养.将体外扩增培养至第3、4代的表皮干细胞(5×104/mL)和真皮成纤维细胞(1×104/mL)共0.5 mL与纤维蛋白支架(0.5 mL)混合凝固构建组织工程皮肤.取4～5周龄雄性裸鼠45只,体重19.5～20.3 g,平均20.0 g,制备背部全层皮肤缺损模型.随机分为5组,每组9只,分别为空白对照组(C组),创面仅覆盖凡士林油纱,自然愈合;单纯支架组(F组),创面移植无细胞的纤维蛋白支架;表皮支架组(S组),创面移植含有表皮干细胞的纤维蛋白支架复合物;成纤维细胞支架组(Fb组),创面移植含有成纤维细胞的纤维蛋白支架复合物;组织工程皮肤组(T组),创面移植组织工程皮肤.术前及术后1、3、6、8周行全身及移植部位大体观察;移植后3、6、8周,取材行组织学、免疫组织化学及扫描电镜观察. 结果 细胞培养4周后,表皮干细胞培养皿内可见圆形细胞,在加有BrdU的培养液中培养6 d后可见BrdU染色阳性细胞;成纤维细胞培养皿内可见梭形细胞.构建的组织工程皮肤可见CK19免疫荧光染色阳性细胞、Nestin染色阳性细胞.移植后T组新生皮肤较其余各组生长快、瘢痕轻.术后6周,C、F、S、Fb及T组皮肤厚度分别为:(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)及(0.60 ±0.047)mm,T组明显厚于其余各组,且差异有统计学意义(P＜0.05).术后3、6、8周,HE染色及扫描电镜示,T组新生表皮层数及真皮成纤维细胞、血管数量均多于其余各组,且T组真皮血管及胶原纤维排列均较其余各组整齐;术后3周,Ⅳ型胶原免疫组织化学染色显示,T组已形成连续的染色带,而其余各组均不连续;术后6周,CK14免疫组织化学染色显示,T组可见阳性细胞,其余各组均未见. 结论 用表皮干细胞、成纤维细胞及纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤移植后能使创面迅速愈合,可望成为一种较理想的组织工程皮肤.
目的 探索由人錶皮榦細胞、成纖維細胞與纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚脩複全層皮膚缺損的可行性. 方法 將人全層皮膚採用胰蛋白酶消化法使錶皮榦細胞和真皮成纖維細胞分離後,分彆在無血清培養基中行原代及傳代培養.將體外擴增培養至第3、4代的錶皮榦細胞(5×104/mL)和真皮成纖維細胞(1×104/mL)共0.5 mL與纖維蛋白支架(0.5 mL)混閤凝固構建組織工程皮膚.取4～5週齡雄性裸鼠45隻,體重19.5～20.3 g,平均20.0 g,製備揹部全層皮膚缺損模型.隨機分為5組,每組9隻,分彆為空白對照組(C組),創麵僅覆蓋凡士林油紗,自然愈閤;單純支架組(F組),創麵移植無細胞的纖維蛋白支架;錶皮支架組(S組),創麵移植含有錶皮榦細胞的纖維蛋白支架複閤物;成纖維細胞支架組(Fb組),創麵移植含有成纖維細胞的纖維蛋白支架複閤物;組織工程皮膚組(T組),創麵移植組織工程皮膚.術前及術後1、3、6、8週行全身及移植部位大體觀察;移植後3、6、8週,取材行組織學、免疫組織化學及掃描電鏡觀察. 結果 細胞培養4週後,錶皮榦細胞培養皿內可見圓形細胞,在加有BrdU的培養液中培養6 d後可見BrdU染色暘性細胞;成纖維細胞培養皿內可見梭形細胞.構建的組織工程皮膚可見CK19免疫熒光染色暘性細胞、Nestin染色暘性細胞.移植後T組新生皮膚較其餘各組生長快、瘢痕輕.術後6週,C、F、S、Fb及T組皮膚厚度分彆為:(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)及(0.60 ±0.047)mm,T組明顯厚于其餘各組,且差異有統計學意義(P＜0.05).術後3、6、8週,HE染色及掃描電鏡示,T組新生錶皮層數及真皮成纖維細胞、血管數量均多于其餘各組,且T組真皮血管及膠原纖維排列均較其餘各組整齊;術後3週,Ⅳ型膠原免疫組織化學染色顯示,T組已形成連續的染色帶,而其餘各組均不連續;術後6週,CK14免疫組織化學染色顯示,T組可見暘性細胞,其餘各組均未見. 結論 用錶皮榦細胞、成纖維細胞及纖維蛋白支架構建的組織工程皮膚移植後能使創麵迅速愈閤,可望成為一種較理想的組織工程皮膚.
목적 탐색유인표피간세포、성섬유세포여섬유단백지가구건적조직공정피부수복전층피부결손적가행성. 방법 장인전층피부채용이단백매소화법사표피간세포화진피성섬유세포분리후,분별재무혈청배양기중행원대급전대배양.장체외확증배양지제3、4대적표피간세포(5×104/mL)화진피성섬유세포(1×104/mL)공0.5 mL여섬유단백지가(0.5 mL)혼합응고구건조직공정피부.취4～5주령웅성라서45지,체중19.5～20.3 g,평균20.0 g,제비배부전층피부결손모형.수궤분위5조,매조9지,분별위공백대조조(C조),창면부복개범사림유사,자연유합;단순지가조(F조),창면이식무세포적섬유단백지가;표피지가조(S조),창면이식함유표피간세포적섬유단백지가복합물;성섬유세포지가조(Fb조),창면이식함유성섬유세포적섬유단백지가복합물;조직공정피부조(T조),창면이식조직공정피부.술전급술후1、3、6、8주행전신급이식부위대체관찰;이식후3、6、8주,취재행조직학、면역조직화학급소묘전경관찰. 결과 세포배양4주후,표피간세포배양명내가견원형세포,재가유BrdU적배양액중배양6 d후가견BrdU염색양성세포;성섬유세포배양명내가견사형세포.구건적조직공정피부가견CK19면역형광염색양성세포、Nestin염색양성세포.이식후T조신생피부교기여각조생장쾌、반흔경.술후6주,C、F、S、Fb급T조피부후도분별위:(0.460 ±0.049)、(0.480 ±0.055)、(0.540 ±0.043)、(0.510 ±0.032)급(0.60 ±0.047)mm,T조명현후우기여각조,차차이유통계학의의(P＜0.05).술후3、6、8주,HE염색급소묘전경시,T조신생표피층수급진피성섬유세포、혈관수량균다우기여각조,차T조진피혈관급효원섬유배렬균교기여각조정제;술후3주,Ⅳ형효원면역조직화학염색현시,T조이형성련속적염색대,이기여각조균불련속;술후6주,CK14면역조직화학염색현시,T조가견양성세포,기여각조균미견. 결론 용표피간세포、성섬유세포급섬유단백지가구건적조직공정피부이식후능사창면신속유합,가망성위일충교이상적조직공정피부.
