中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
10期
1891-1895
,共5页
陈燕玲%王燕%贲晓明%周晓玉%苗登顺
陳燕玲%王燕%賁曉明%週曉玉%苗登順
진연령%왕연%분효명%주효옥%묘등순
外周血间充质干细胞%表皮生长因子%分离培养%诱导
外週血間充質榦細胞%錶皮生長因子%分離培養%誘導
외주혈간충질간세포%표피생장인자%분리배양%유도
背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差.目的:观察表皮生长因子对体外分离培养的原代小鼠外周血间充质干细胞克隆形成的影响,以及外周血间充质干细胞传代后的多向分化潜能.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-09在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成.材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16只,购于南京医科大学骨与干细胞研究中心实验动物中心.重组人表皮生长因子为Sigma公司产品.方法:无菌条件下从小鼠心脏采血,裂解红细胞后应用贴壁法分离外周血间充质干细胞,通过传代进行纯化和扩增.将原代细胞分2组进行体外培养,实验组向α-MEM培养液中加入10μg/L表皮生长凶子,对照组给予不含表皮生长因子的α-MEM培养液,16 d后行亚甲基蓝染色,计算克隆面积.取第3代外周血间充质干细胞,以1×104/cm2密度接种后,分别向成骨和脂肪方向诱导分化.主要观察指标:外周血间允质干细胞的牛长特性,外周血间充质干细胞体外诱导成骨、成脂能力.结果:倒置相差显微镜下,外周血间充质干细胞贴壁生长,形态类似于骨髓间充质干细胞,呈成纤维细胞样;但其形成克隆的时间较骨髓间充质下细胞有所推迟,凡原代细胞克隆形成率低于骨髓间充质干细胞:亚甲基蓝染色结果示实验组外周血间充质干细胞克隆形成率明显高于对照组(P＜0.05).外周血间充质干细胞成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、总胶原染色及茜素红染色均呈强阳性;成脂诱导后油红染色里阳性,有一定数量的脂滴形成.结论:外周血中存在少量的间充质干细胞,能自我增殖,表皮生长因子可有效促进原代外周血间充质干细胞克隆的形成;体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨和成脂分化特性.
揹景:目前已有很多實驗證明外週血中存在間充質榦細胞,但由于所用分離篩選方法、培養條件的不同導緻瞭結果的多樣性,且實驗可重複性較差.目的:觀察錶皮生長因子對體外分離培養的原代小鼠外週血間充質榦細胞剋隆形成的影響,以及外週血間充質榦細胞傳代後的多嚮分化潛能.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2007-10/2008-09在南京醫科大學骨與榦細胞研究中心完成.材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16隻,購于南京醫科大學骨與榦細胞研究中心實驗動物中心.重組人錶皮生長因子為Sigma公司產品.方法:無菌條件下從小鼠心髒採血,裂解紅細胞後應用貼壁法分離外週血間充質榦細胞,通過傳代進行純化和擴增.將原代細胞分2組進行體外培養,實驗組嚮α-MEM培養液中加入10μg/L錶皮生長兇子,對照組給予不含錶皮生長因子的α-MEM培養液,16 d後行亞甲基藍染色,計算剋隆麵積.取第3代外週血間充質榦細胞,以1×104/cm2密度接種後,分彆嚮成骨和脂肪方嚮誘導分化.主要觀察指標:外週血間允質榦細胞的牛長特性,外週血間充質榦細胞體外誘導成骨、成脂能力.結果:倒置相差顯微鏡下,外週血間充質榦細胞貼壁生長,形態類似于骨髓間充質榦細胞,呈成纖維細胞樣;但其形成剋隆的時間較骨髓間充質下細胞有所推遲,凡原代細胞剋隆形成率低于骨髓間充質榦細胞:亞甲基藍染色結果示實驗組外週血間充質榦細胞剋隆形成率明顯高于對照組(P＜0.05).外週血間充質榦細胞成骨誘導後,堿性燐痠酶染色、總膠原染色及茜素紅染色均呈彊暘性;成脂誘導後油紅染色裏暘性,有一定數量的脂滴形成.結論:外週血中存在少量的間充質榦細胞,能自我增殖,錶皮生長因子可有效促進原代外週血間充質榦細胞剋隆的形成;體外分離培養的外週血間充質榦細胞具備成骨和成脂分化特性.
배경:목전이유흔다실험증명외주혈중존재간충질간세포,단유우소용분리사선방법、배양조건적불동도치료결과적다양성,차실험가중복성교차.목적:관찰표피생장인자대체외분리배양적원대소서외주혈간충질간세포극륭형성적영향,이급외주혈간충질간세포전대후적다향분화잠능.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-10/2008-09재남경의과대학골여간세포연구중심완성.재료:웅성성년C57BL/6J소서16지,구우남경의과대학골여간세포연구중심실험동물중심.중조인표피생장인자위Sigma공사산품.방법:무균조건하종소서심장채혈,렬해홍세포후응용첩벽법분리외주혈간충질간세포,통과전대진행순화화확증.장원대세포분2조진행체외배양,실험조향α-MEM배양액중가입10μg/L표피생장흉자,대조조급여불함표피생장인자적α-MEM배양액,16 d후행아갑기람염색,계산극륭면적.취제3대외주혈간충질간세포,이1×104/cm2밀도접충후,분별향성골화지방방향유도분화.주요관찰지표:외주혈간윤질간세포적우장특성,외주혈간충질간세포체외유도성골、성지능력.결과:도치상차현미경하,외주혈간충질간세포첩벽생장,형태유사우골수간충질간세포,정성섬유세포양;단기형성극륭적시간교골수간충질하세포유소추지,범원대세포극륭형성솔저우골수간충질간세포:아갑기람염색결과시실험조외주혈간충질간세포극륭형성솔명현고우대조조(P＜0.05).외주혈간충질간세포성골유도후,감성린산매염색、총효원염색급천소홍염색균정강양성;성지유도후유홍염색리양성,유일정수량적지적형성.결론:외주혈중존재소량적간충질간세포,능자아증식,표피생장인자가유효촉진원대외주혈간충질간세포극륭적형성;체외분리배양적외주혈간충질간세포구비성골화성지분화특성.
