实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2011年
2期
1-6,后插1-后插2
,共7页
张淑静%江其辉%卢清君%王宁利%陈振文%卢清显
張淑靜%江其輝%盧清君%王寧利%陳振文%盧清顯
장숙정%강기휘%로청군%왕저리%진진문%로청현
Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶%loxp位点%X-gal染色
Tyro3、Axl受體酪氨痠激酶%loxp位點%X-gal染色
Tyro3、Axl수체락안산격매%loxp위점%X-gal염색
目的 采用大肠杆菌β-半乳糖酶基因LacZ作为报告基因,建立Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶含有loxp位点的转基因小鼠.与不同组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空性表达Tyro3、Axl的转基因小鼠,为研究其在各个组织中的功能奠定基础.方法 构建含有loxp位点的Tyro3、Axl受体酪氨酸激酶质粒,测序正确后,通过显微注射法将插入CAG启动子下游的Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3基因的转基因载体注射人BDF1供体鼠受精卵,移植受精卵至ICR受体鼠,待产仔后,通过双引物PCR鉴定F0以及Fn代小鼠的基因型,RT-PCR,X-gal染色观察小鼠组织中LacZ基因,运用WB(Western Blot)检测转基因小鼠和野生型小鼠体内目的蛋白表达的差异.结果 获得了含有目的基因的转基因阳性小鼠;通过RT-PCR对阳性小鼠证明LacZ基因的存在;对存在LacZ基因的小鼠进行Xgal染色,在Geo-STOP-msTyro3的脑、睾丸、胸腺中观察到蓝色沉淀,在Geo-STOP-msAxl的脑、心、肾中观察到蓝色沉淀,间接说明目的基因能表达的组织和器官;对双阳性的Geo-STOP-msTyro3、Geo-STOP-msAxl转基因小鼠和野生型小鼠.WB检验证实Tyro3、Axl基因的表达没有差异,说明在加入stop序列之后,Tyro3基因确实存在,而且表达受到抑制.结论 成功建立Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyr03酪氨酸受体转基因小鼠.
目的 採用大腸桿菌β-半乳糖酶基因LacZ作為報告基因,建立Tyro3、Axl受體酪氨痠激酶含有loxp位點的轉基因小鼠.與不同組織特異性Cre小鼠雜交,穫得時空性錶達Tyro3、Axl的轉基因小鼠,為研究其在各箇組織中的功能奠定基礎.方法 構建含有loxp位點的Tyro3、Axl受體酪氨痠激酶質粒,測序正確後,通過顯微註射法將插入CAG啟動子下遊的Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3基因的轉基因載體註射人BDF1供體鼠受精卵,移植受精卵至ICR受體鼠,待產仔後,通過雙引物PCR鑒定F0以及Fn代小鼠的基因型,RT-PCR,X-gal染色觀察小鼠組織中LacZ基因,運用WB(Western Blot)檢測轉基因小鼠和野生型小鼠體內目的蛋白錶達的差異.結果 穫得瞭含有目的基因的轉基因暘性小鼠;通過RT-PCR對暘性小鼠證明LacZ基因的存在;對存在LacZ基因的小鼠進行Xgal染色,在Geo-STOP-msTyro3的腦、睪汍、胸腺中觀察到藍色沉澱,在Geo-STOP-msAxl的腦、心、腎中觀察到藍色沉澱,間接說明目的基因能錶達的組織和器官;對雙暘性的Geo-STOP-msTyro3、Geo-STOP-msAxl轉基因小鼠和野生型小鼠.WB檢驗證實Tyro3、Axl基因的錶達沒有差異,說明在加入stop序列之後,Tyro3基因確實存在,而且錶達受到抑製.結論 成功建立Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyr03酪氨痠受體轉基因小鼠.
목적 채용대장간균β-반유당매기인LacZ작위보고기인,건립Tyro3、Axl수체락안산격매함유loxp위점적전기인소서.여불동조직특이성Cre소서잡교,획득시공성표체Tyro3、Axl적전기인소서,위연구기재각개조직중적공능전정기출.방법 구건함유loxp위점적Tyro3、Axl수체락안산격매질립,측서정학후,통과현미주사법장삽입CAG계동자하유적Geo-STOP-msAxl급Geo-STOP-msTyro3기인적전기인재체주사인BDF1공체서수정란,이식수정란지ICR수체서,대산자후,통과쌍인물PCR감정F0이급Fn대소서적기인형,RT-PCR,X-gal염색관찰소서조직중LacZ기인,운용WB(Western Blot)검측전기인소서화야생형소서체내목적단백표체적차이.결과 획득료함유목적기인적전기인양성소서;통과RT-PCR대양성소서증명LacZ기인적존재;대존재LacZ기인적소서진행Xgal염색,재Geo-STOP-msTyro3적뇌、고환、흉선중관찰도람색침정,재Geo-STOP-msAxl적뇌、심、신중관찰도람색침정,간접설명목적기인능표체적조직화기관;대쌍양성적Geo-STOP-msTyro3、Geo-STOP-msAxl전기인소서화야생형소서.WB검험증실Tyro3、Axl기인적표체몰유차이,설명재가입stop서렬지후,Tyro3기인학실존재,이차표체수도억제.결론 성공건립Geo-STOP-msAxl급Geo-STOP-msTyr03락안산수체전기인소서.
