生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
838-841
,共4页
樊炜%贾帅争%王怡%阎少多%高博%彭剑淳%詹林盛
樊煒%賈帥爭%王怡%閻少多%高博%彭劍淳%詹林盛
번위%가수쟁%왕이%염소다%고박%팽검순%첨림성
Gaussia萤光素酶%膜锚定%慢病毒包装%生物荧光成像
Gaussia螢光素酶%膜錨定%慢病毒包裝%生物熒光成像
Gaussia형광소매%막묘정%만병독포장%생물형광성상
目的:制备表达膜锚定Gaussia萤光素酶(extGluc)报告基因的慢病毒,用于标记细胞.方法:将报告基因extGluc克隆至慢病毒载体pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre (VeGFP)中,以聚乙烯亚胺(PEI)介导,将慢病毒包装所需4种质粒(pVeGFP-extGLuc、pMDL、pRey、pVSVG),转染293FT细胞,72 h后收集病毒上清进行浓缩,感染293FT细胞,并用流式细胞仪检测病毒滴度,生物荧光成像和化学发光分析extGluc的表达；之后,用收集的慢病毒感染人单核细胞白血病细胞株U937.结果:对经PCR筛选出的阳性克隆所含质粒进行酶切鉴定,表明extGlu报告基因插入载体中；重组慢病毒包装成功且病毒滴度为5×106 TU/mL;用包装的病毒颗粒感染293FT、细胞,生物荧光成像和化学发光证实extGluc的膜定位,且酶活性与细胞数目呈线性相关；病毒颗粒能够感染悬浮细胞U937.结论:包装了extGluc标记的重组慢病毒,可用于标记细胞,为体内监测细胞迁移、聚集和变化提供了一种方法.
目的:製備錶達膜錨定Gaussia螢光素酶(extGluc)報告基因的慢病毒,用于標記細胞.方法:將報告基因extGluc剋隆至慢病毒載體pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre (VeGFP)中,以聚乙烯亞胺(PEI)介導,將慢病毒包裝所需4種質粒(pVeGFP-extGLuc、pMDL、pRey、pVSVG),轉染293FT細胞,72 h後收集病毒上清進行濃縮,感染293FT細胞,併用流式細胞儀檢測病毒滴度,生物熒光成像和化學髮光分析extGluc的錶達；之後,用收集的慢病毒感染人單覈細胞白血病細胞株U937.結果:對經PCR篩選齣的暘性剋隆所含質粒進行酶切鑒定,錶明extGlu報告基因插入載體中；重組慢病毒包裝成功且病毒滴度為5×106 TU/mL;用包裝的病毒顆粒感染293FT、細胞,生物熒光成像和化學髮光證實extGluc的膜定位,且酶活性與細胞數目呈線性相關；病毒顆粒能夠感染懸浮細胞U937.結論:包裝瞭extGluc標記的重組慢病毒,可用于標記細胞,為體內鑑測細胞遷移、聚集和變化提供瞭一種方法.
목적:제비표체막묘정Gaussia형광소매(extGluc)보고기인적만병독,용우표기세포.방법:장보고기인extGluc극륭지만병독재체pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre (VeGFP)중,이취을희아알(PEI)개도,장만병독포장소수4충질립(pVeGFP-extGLuc、pMDL、pRey、pVSVG),전염293FT세포,72 h후수집병독상청진행농축,감염293FT세포,병용류식세포의검측병독적도,생물형광성상화화학발광분석extGluc적표체；지후,용수집적만병독감염인단핵세포백혈병세포주U937.결과:대경PCR사선출적양성극륭소함질립진행매절감정,표명extGlu보고기인삽입재체중；중조만병독포장성공차병독적도위5×106 TU/mL;용포장적병독과립감염293FT、세포,생물형광성상화화학발광증실extGluc적막정위,차매활성여세포수목정선성상관；병독과립능구감염현부세포U937.결론:포장료extGluc표기적중조만병독,가용우표기세포,위체내감측세포천이、취집화변화제공료일충방법.
