中国组织化学与细胞化学杂志
中國組織化學與細胞化學雜誌
중국조직화학여세포화학잡지
CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISY AND CYTOCHEMISY
2012年
3期
240-244
,共5页
焦宗宪%程航远%张强弩%朱艳芳%王晨昱%王勇%刘沨
焦宗憲%程航遠%張彊弩%硃豔芳%王晨昱%王勇%劉沨
초종헌%정항원%장강노%주염방%왕신욱%왕용%류풍
大鼠%肺泡上皮细胞%分离%纯化%细胞鉴定
大鼠%肺泡上皮細胞%分離%純化%細胞鑒定
대서%폐포상피세포%분리%순화%세포감정
目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cells typeⅡ,AECⅡ)分离、纯化、原代培养及鉴定的方法.方法 用4.2U/ml的弹性蛋白酶通过气管插管注入肺泡内,消化分离AECⅡ.把细胞悬液接种到包被有大鼠IgG的塑料平皿中纯化细胞.用电镜、碱性磷酸酶显色法、改良巴氏染色法、单宁酸染色法、免疫组化染色法鉴定AECⅡ.结果 细胞纯度达到90％以上,倒置显微镜下可见细胞呈岛屿状生长.电镜下可见细胞内有大量板层小体,包膜上有绒毛结构.碱性磷酸酶染色法(BCIP/NBT)可见胞浆内有蓝色颗粒.改良巴氏染色法、单宁酸染色法可见胞浆内有黑色颗粒.抗大鼠肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)免疫组化染色呈阳性反应.结论 弹性蛋白酶作用温和,不损伤胞膜,分离所得细胞活力好; IgG免疫粘附纯化法操作简单,纯化效率高.电镜、BCIP/NBT、巴氏染色,单宁酸染色及免疫组化染色等鉴定方法稳定可靠,特异性高.
目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(alveolar epithelial cells typeⅡ,AECⅡ)分離、純化、原代培養及鑒定的方法.方法 用4.2U/ml的彈性蛋白酶通過氣管插管註入肺泡內,消化分離AECⅡ.把細胞懸液接種到包被有大鼠IgG的塑料平皿中純化細胞.用電鏡、堿性燐痠酶顯色法、改良巴氏染色法、單寧痠染色法、免疫組化染色法鑒定AECⅡ.結果 細胞純度達到90％以上,倒置顯微鏡下可見細胞呈島嶼狀生長.電鏡下可見細胞內有大量闆層小體,包膜上有絨毛結構.堿性燐痠酶染色法(BCIP/NBT)可見胞漿內有藍色顆粒.改良巴氏染色法、單寧痠染色法可見胞漿內有黑色顆粒.抗大鼠肺泡錶麵活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)免疫組化染色呈暘性反應.結論 彈性蛋白酶作用溫和,不損傷胞膜,分離所得細胞活力好; IgG免疫粘附純化法操作簡單,純化效率高.電鏡、BCIP/NBT、巴氏染色,單寧痠染色及免疫組化染色等鑒定方法穩定可靠,特異性高.
목적 건립대서폐포Ⅱ형상피세포(alveolar epithelial cells typeⅡ,AECⅡ)분리、순화、원대배양급감정적방법.방법 용4.2U/ml적탄성단백매통과기관삽관주입폐포내,소화분리AECⅡ.파세포현액접충도포피유대서IgG적소료평명중순화세포.용전경、감성린산매현색법、개량파씨염색법、단저산염색법、면역조화염색법감정AECⅡ.결과 세포순도체도90％이상,도치현미경하가견세포정도서상생장.전경하가견세포내유대량판층소체,포막상유융모결구.감성린산매염색법(BCIP/NBT)가견포장내유람색과립.개량파씨염색법、단저산염색법가견포장내유흑색과립.항대서폐포표면활성단백A(surfactant protein A,SP-A)면역조화염색정양성반응.결론 탄성단백매작용온화,불손상포막,분리소득세포활력호; IgG면역점부순화법조작간단,순화효솔고.전경、BCIP/NBT、파씨염색,단저산염색급면역조화염색등감정방법은정가고,특이성고.
