实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2011年
6期
448-451
,共4页
王军%吴值荣%朱登纳%高峰%侯艳艳%陈海%王留霞
王軍%吳值榮%硃登納%高峰%侯豔豔%陳海%王留霞
왕군%오치영%주등납%고봉%후염염%진해%왕류하
质粒pcDNA3.1%人胰岛素样生长因子1%转染%脐血%神经干细胞
質粒pcDNA3.1%人胰島素樣生長因子1%轉染%臍血%神經榦細胞
질립pcDNA3.1%인이도소양생장인자1%전염%제혈%신경간세포
目的 构建人胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒表达载体,并观察重组体pcDNA3.1-IGF-1转染后的脐血源性神经干细胞(NSCs)中IGF-1基因的表达情况.方法 通过反转录-PCR(RT-PCR)方法从胎肝中提取IGF-1基因,胶回收方法分别纯化PCR产物(IGF-1基因)和质粒pcDNA3.1,二者分别由DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切后,经T4 DNA Ligase连接的方法将IGF-1基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1中,采用测序方法及DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1-IGF-1及空质粒pcDNA3.1分别转染至脐血源性NSCs内,经G418抗性筛选后,利用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测IGF-1基因在基因转染脐血源性NSCs内的表达情况.结果 IGF-1基因从胎肝中成功提取.重组体pcDNA3.1-IGF-1经基因测序及DNA限制性内切酶BamH Ⅰ与 Hind Ⅲ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1构建正确.重组体经脂质体法转染脐血源性NSCs 24 h后,经G418筛选2周得到细胞抗性克隆,免疫细胞化学法检测到IGF-1基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中成功表达.RT-PCR方法检测到重组质粒pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs中IGF-1 mRNA表达阳性,而空质粒pcDNA3.1转染的脐血源性NSCs中IGF-1 mRNA表达阴性.结论 IGF-1基因可在重组质粒表达载体pcDNA3.1-IGF-1转染的脐血源性NSCs内成功表达.
目的 構建人胰島素樣生長因子1(IGF-1)質粒錶達載體,併觀察重組體pcDNA3.1-IGF-1轉染後的臍血源性神經榦細胞(NSCs)中IGF-1基因的錶達情況.方法 通過反轉錄-PCR(RT-PCR)方法從胎肝中提取IGF-1基因,膠迴收方法分彆純化PCR產物(IGF-1基因)和質粒pcDNA3.1,二者分彆由DNA限製性內切酶BamH Ⅰ與 Hind Ⅲ雙酶切後,經T4 DNA Ligase連接的方法將IGF-1基因剋隆到質粒錶達載體pcDNA3.1中,採用測序方法及DNA限製性內切酶BamH Ⅰ與 Hind Ⅲ雙酶切方法鑒定重組質粒,脂質體轉染法將重組體pcDNA3.1-IGF-1及空質粒pcDNA3.1分彆轉染至臍血源性NSCs內,經G418抗性篩選後,利用免疫細胞化學法和RT-PCR法檢測IGF-1基因在基因轉染臍血源性NSCs內的錶達情況.結果 IGF-1基因從胎肝中成功提取.重組體pcDNA3.1-IGF-1經基因測序及DNA限製性內切酶BamH Ⅰ與 Hind Ⅲ雙酶切證實質粒錶達載體pcDNA3.1-IGF-1構建正確.重組體經脂質體法轉染臍血源性NSCs 24 h後,經G418篩選2週得到細胞抗性剋隆,免疫細胞化學法檢測到IGF-1基因在重組質粒錶達載體pcDNA3.1-IGF-1轉染的臍血源性NSCs中成功錶達.RT-PCR方法檢測到重組質粒pcDNA3.1-IGF-1轉染的臍血源性NSCs中IGF-1 mRNA錶達暘性,而空質粒pcDNA3.1轉染的臍血源性NSCs中IGF-1 mRNA錶達陰性.結論 IGF-1基因可在重組質粒錶達載體pcDNA3.1-IGF-1轉染的臍血源性NSCs內成功錶達.
목적 구건인이도소양생장인자1(IGF-1)질립표체재체,병관찰중조체pcDNA3.1-IGF-1전염후적제혈원성신경간세포(NSCs)중IGF-1기인적표체정황.방법 통과반전록-PCR(RT-PCR)방법종태간중제취IGF-1기인,효회수방법분별순화PCR산물(IGF-1기인)화질립pcDNA3.1,이자분별유DNA한제성내절매BamH Ⅰ여 Hind Ⅲ쌍매절후,경T4 DNA Ligase련접적방법장IGF-1기인극륭도질립표체재체pcDNA3.1중,채용측서방법급DNA한제성내절매BamH Ⅰ여 Hind Ⅲ쌍매절방법감정중조질립,지질체전염법장중조체pcDNA3.1-IGF-1급공질립pcDNA3.1분별전염지제혈원성NSCs내,경G418항성사선후,이용면역세포화학법화RT-PCR법검측IGF-1기인재기인전염제혈원성NSCs내적표체정황.결과 IGF-1기인종태간중성공제취.중조체pcDNA3.1-IGF-1경기인측서급DNA한제성내절매BamH Ⅰ여 Hind Ⅲ쌍매절증실질립표체재체pcDNA3.1-IGF-1구건정학.중조체경지질체법전염제혈원성NSCs 24 h후,경G418사선2주득도세포항성극륭,면역세포화학법검측도IGF-1기인재중조질립표체재체pcDNA3.1-IGF-1전염적제혈원성NSCs중성공표체.RT-PCR방법검측도중조질립pcDNA3.1-IGF-1전염적제혈원성NSCs중IGF-1 mRNA표체양성,이공질립pcDNA3.1전염적제혈원성NSCs중IGF-1 mRNA표체음성.결론 IGF-1기인가재중조질립표체재체pcDNA3.1-IGF-1전염적제혈원성NSCs내성공표체.
