中华预防医学杂志
中華預防醫學雜誌
중화예방의학잡지
CHINESE JOURNAL OF
2003年
6期
442-445
,共4页
郭立征%卢晓燕%项金忠%章以浩%郭存三%张鹏飞
郭立徵%盧曉燕%項金忠%章以浩%郭存三%張鵬飛
곽립정%로효연%항금충%장이호%곽존삼%장붕비
疱疹病毒3型,人%糖蛋白类%杆状病毒科%基因表达
皰疹病毒3型,人%糖蛋白類%桿狀病毒科%基因錶達
포진병독3형,인%당단백류%간상병독과%기인표체
目的将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化.方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序.重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf 9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI.通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性.结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72 h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58 000和70 000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似.动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体.SDS-PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%.纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性.结论应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础.
目的將北京水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)84-7株剋隆糖蛋白I(gpI)基因在桿狀病毒-昆蟲細胞錶達繫統中錶達,併對其錶達產物進行純化.方法採用PCR方法從VZV DNA中擴增gpI全基因序列,併將其插入桿狀病毒轉移質粒pBacPAK9中,穫得重組轉移質粒pBacVZVgpI,對pBacVZVgpI中的插入基因進行測序.重組轉移質粒與線性桿狀病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共轉染Sf 9昆蟲細胞,穫得重組病毒BacPAK-gpI.通過親和層析純化重組蛋白,併檢測其抗原性.結果 PCR擴增得到gpI基因,測序結果錶明剋隆的外源基因正確.經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、免疫印跡(western-blot)方法證明gpI基因在昆蟲細胞中穫得錶達,錶達產物在培養72 h達到高峰,重組蛋白的相對分子質量約為58 000和70 000,與理論值相符,蛋白質加工與天然蛋白類似.動物實驗結果錶明,重組蛋白具有較好的免疫原性,可刺激小鼠產生中和抗體.SDS-PAGE檢測純化的重組蛋白,純度達80%.純化蛋白經western-blot和ELISA檢測後顯示,具有特異的抗體結閤活性.結論應用昆蟲細胞錶達水痘-帶狀皰疹病毒gpI基因,可為水痘-帶狀皰疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研製和製備亞單位疫苗提供基礎.
목적장북경수두-대상포진병독(VZV)84-7주극륭당단백I(gpI)기인재간상병독-곤충세포표체계통중표체,병대기표체산물진행순화.방법채용PCR방법종VZV DNA중확증gpI전기인서렬,병장기삽입간상병독전이질립pBacPAK9중,획득중조전이질립pBacVZVgpI,대pBacVZVgpI중적삽입기인진행측서.중조전이질립여선성간상병독BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)공전염Sf 9곤충세포,획득중조병독BacPAK-gpI.통과친화층석순화중조단백,병검측기항원성.결과 PCR확증득도gpI기인,측서결과표명극륭적외원기인정학.경SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)、면역인적(western-blot)방법증명gpI기인재곤충세포중획득표체,표체산물재배양72 h체도고봉,중조단백적상대분자질량약위58 000화70 000,여이론치상부,단백질가공여천연단백유사.동물실험결과표명,중조단백구유교호적면역원성,가자격소서산생중화항체.SDS-PAGE검측순화적중조단백,순도체80%.순화단백경western-blot화ELISA검측후현시,구유특이적항체결합활성.결론응용곤충세포표체수두-대상포진병독gpI기인,가위수두-대상포진병독항원정량분석、당단백ELISA적연제화제비아단위역묘제공기출.
