中国寄生虫病防治杂志
中國寄生蟲病防治雜誌
중국기생충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITIC DISEASE CONTROL
2005年
3期
203-205
,共3页
梁瑜%肖建华%廖力%伍和平%张愉快%刘传爱%杨秋林
樑瑜%肖建華%廖力%伍和平%張愉快%劉傳愛%楊鞦林
량유%초건화%료력%오화평%장유쾌%류전애%양추림
血吸虫,日本%磷酸甘油酸激酶%T/A克隆%序列分析%RT-PCR
血吸蟲,日本%燐痠甘油痠激酶%T/A剋隆%序列分析%RT-PCR
혈흡충,일본%린산감유산격매%T/A극륭%서렬분석%RT-PCR
目的获取日本血吸虫磷酸甘油酸激酶(SjPGK)编码基因片段,分析其核苷酸序列,为日本血吸虫病疫苗研制提供候选抗原分子.方法根据曼氏血吸虫磷酸甘油酸激酶(SmPGK) cDNA 序列设计1对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,从日本血吸虫成虫总RNA中扩增 SjPGK 基因片段.利用T/A克隆法,将其克隆入 pMD18-T 载体,经双酶切分析和 PCR 鉴定,将阳性克隆进行脱氧核糖核酸序列测定;运用Blast程序,将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI 数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较.结果 RT-PCR 特异性扩增出1条长约830 bp大小的条带;经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pMD18-T-SjPGK中含有所扩增的基因序列;脱氧核糖核酸序列测定和分析,SjPGK 基因片段长为830 bp,与 SmPGK 的核苷酸同源性为85%,分值为 672;氨基酸同源性为94%,分值为473.结论成功克隆SjPGK 编码基因片段,为进一步实验提供了条件.
目的穫取日本血吸蟲燐痠甘油痠激酶(SjPGK)編碼基因片段,分析其覈苷痠序列,為日本血吸蟲病疫苗研製提供候選抗原分子.方法根據曼氏血吸蟲燐痠甘油痠激酶(SmPGK) cDNA 序列設計1對引物,採用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法,從日本血吸蟲成蟲總RNA中擴增 SjPGK 基因片段.利用T/A剋隆法,將其剋隆入 pMD18-T 載體,經雙酶切分析和 PCR 鑒定,將暘性剋隆進行脫氧覈糖覈痠序列測定;運用Blast程序,將測序結果及其推導的編碼氨基痠序列與NCBI 數據庫在覈苷痠水平和氨基痠水平進行同源性比較.結果 RT-PCR 特異性擴增齣1條長約830 bp大小的條帶;經酶切和PCR鑒定錶明所構建的質粒pMD18-T-SjPGK中含有所擴增的基因序列;脫氧覈糖覈痠序列測定和分析,SjPGK 基因片段長為830 bp,與 SmPGK 的覈苷痠同源性為85%,分值為 672;氨基痠同源性為94%,分值為473.結論成功剋隆SjPGK 編碼基因片段,為進一步實驗提供瞭條件.
목적획취일본혈흡충린산감유산격매(SjPGK)편마기인편단,분석기핵감산서렬,위일본혈흡충병역묘연제제공후선항원분자.방법근거만씨혈흡충린산감유산격매(SmPGK) cDNA 서렬설계1대인물,채용역전록-취합매련반응(RT-PCR)방법,종일본혈흡충성충총RNA중확증 SjPGK 기인편단.이용T/A극륭법,장기극륭입 pMD18-T 재체,경쌍매절분석화 PCR 감정,장양성극륭진행탈양핵당핵산서렬측정;운용Blast정서,장측서결과급기추도적편마안기산서렬여NCBI 수거고재핵감산수평화안기산수평진행동원성비교.결과 RT-PCR 특이성확증출1조장약830 bp대소적조대;경매절화PCR감정표명소구건적질립pMD18-T-SjPGK중함유소확증적기인서렬;탈양핵당핵산서렬측정화분석,SjPGK 기인편단장위830 bp,여 SmPGK 적핵감산동원성위85%,분치위 672;안기산동원성위94%,분치위473.결론성공극륭SjPGK 편마기인편단,위진일보실험제공료조건.
