四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
1期
14-18
,共5页
牛晓宇%彭芝兰%段伟强%王和%陈悦悦%范余娟%程易凡%钱晓蕾
牛曉宇%彭芝蘭%段偉彊%王和%陳悅悅%範餘娟%程易凡%錢曉蕾
우효우%팽지란%단위강%왕화%진열열%범여연%정역범%전효뢰
RNA干涉%HPV16%E6%宫颈癌%基因治疗
RNA榦涉%HPV16%E6%宮頸癌%基因治療
RNA간섭%HPV16%E6%궁경암%기인치료
目的采用RNA干涉(RNAi)技术干扰宫颈癌HPV16 E6基因转录,通过体外和体内实验了解其特异性抑制HPV16 E6基因的效率.方法设计合成针对HPV16 E6的小干扰RNA(siRNA),借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过测定转染后不同时间点的细胞凋亡率、HPV16 E6 mRNA及蛋白表达变化了解基因抑制的效率.体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将E6 siRNA直接注入瘤体,观察肿瘤体积的变化,肿瘤切片HPV16 E6免疫组化染色,观察肿瘤坏死和细胞的凋亡.结果HPV16 E6 siRNA转染细胞后24 h、48 h、5 d和9 d时凋亡率分别为7.7%、11.8%、37.4%和12.6%.RT-PCR显示转染后24 h、48 h、5 d和9 d HPV16 E6 mRNA量减少了77%、83%、59%和41%.Western blot显示转染后的HPV16 E6蛋白表达在24 h、48 h、5 d明显减少,9 d时有所恢复;流式细胞仪HPV16 E6蛋白定量测定结果显示,转染后24 h、48 h、5 d和9 d蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%、71.3%和57.4%.体内实验瘤内注射HPV16 E6 siRNA明显抑制肿瘤的生长,HPV16 E6蛋白表达明显受抑,肿瘤组织坏死和细胞凋亡增加,重复给药较单次给药效果更好.结论体内和体外实验均表明RNA干涉HPV16 E6基因的效果具有特异性和高效性.
目的採用RNA榦涉(RNAi)技術榦擾宮頸癌HPV16 E6基因轉錄,通過體外和體內實驗瞭解其特異性抑製HPV16 E6基因的效率.方法設計閤成針對HPV16 E6的小榦擾RNA(siRNA),藉脂質體轉染宮頸癌CaSki細胞,通過測定轉染後不同時間點的細胞凋亡率、HPV16 E6 mRNA及蛋白錶達變化瞭解基因抑製的效率.體內實驗中建立子宮頸癌荷瘤裸鼠模型,將E6 siRNA直接註入瘤體,觀察腫瘤體積的變化,腫瘤切片HPV16 E6免疫組化染色,觀察腫瘤壞死和細胞的凋亡.結果HPV16 E6 siRNA轉染細胞後24 h、48 h、5 d和9 d時凋亡率分彆為7.7%、11.8%、37.4%和12.6%.RT-PCR顯示轉染後24 h、48 h、5 d和9 d HPV16 E6 mRNA量減少瞭77%、83%、59%和41%.Western blot顯示轉染後的HPV16 E6蛋白錶達在24 h、48 h、5 d明顯減少,9 d時有所恢複;流式細胞儀HPV16 E6蛋白定量測定結果顯示,轉染後24 h、48 h、5 d和9 d蛋白錶達抑製率分彆為79.7%、80.4%、71.3%和57.4%.體內實驗瘤內註射HPV16 E6 siRNA明顯抑製腫瘤的生長,HPV16 E6蛋白錶達明顯受抑,腫瘤組織壞死和細胞凋亡增加,重複給藥較單次給藥效果更好.結論體內和體外實驗均錶明RNA榦涉HPV16 E6基因的效果具有特異性和高效性.
목적채용RNA간섭(RNAi)기술간우궁경암HPV16 E6기인전록,통과체외화체내실험료해기특이성억제HPV16 E6기인적효솔.방법설계합성침대HPV16 E6적소간우RNA(siRNA),차지질체전염궁경암CaSki세포,통과측정전염후불동시간점적세포조망솔、HPV16 E6 mRNA급단백표체변화료해기인억제적효솔.체내실험중건립자궁경암하류라서모형,장E6 siRNA직접주입류체,관찰종류체적적변화,종류절편HPV16 E6면역조화염색,관찰종류배사화세포적조망.결과HPV16 E6 siRNA전염세포후24 h、48 h、5 d화9 d시조망솔분별위7.7%、11.8%、37.4%화12.6%.RT-PCR현시전염후24 h、48 h、5 d화9 d HPV16 E6 mRNA량감소료77%、83%、59%화41%.Western blot현시전염후적HPV16 E6단백표체재24 h、48 h、5 d명현감소,9 d시유소회복;류식세포의HPV16 E6단백정량측정결과현시,전염후24 h、48 h、5 d화9 d단백표체억제솔분별위79.7%、80.4%、71.3%화57.4%.체내실험류내주사HPV16 E6 siRNA명현억제종류적생장,HPV16 E6단백표체명현수억,종류조직배사화세포조망증가,중복급약교단차급약효과경호.결론체내화체외실험균표명RNA간섭HPV16 E6기인적효과구유특이성화고효성.
