中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2007年
2期
140-144
,共5页
杨勇%任玉红%梁宝怀%朱雅宁%梁智选
楊勇%任玉紅%樑寶懷%硃雅寧%樑智選
양용%임옥홍%량보부%주아저%량지선
鸡传染性贫血病毒%VP1基因%原核表达%酶联免疫吸附试验
鷄傳染性貧血病毒%VP1基因%原覈錶達%酶聯免疫吸附試驗
계전염성빈혈병독%VP1기인%원핵표체%매련면역흡부시험
参考已发表的鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP1基因序列,设计并合成了2对引物,经PCR扩增获得了2个基因片段.将PCR产物克隆至pGEM-T Easy载体中,成功构建了克隆载体pGEM-CIAVVP1A和pGEM-CIAVVP1B.将上述重组质粒和原核表达载体pMXB10分别用Nde Ⅰ+EcoR Ⅰ、NdeⅠ+Xho Ⅰ双酶切,并将纯化的2个基因亚克隆至pMXB10中,构建出原核表达载体pMXB10-VP1A和pMXB10-VP1B.在0.3 mmol/L IPTG诱导下,目的基因在大肠杆菌ER2566中以分泌型得到了大量表达.Western-blot分析发现,表达蛋白具有CIAV抗原性.表达蛋白经纯化后作为包被抗原,用间接ELISA鉴定,与CIAV阳性血清均能发生特异性反应.2组蛋白免疫SPF鸡后,用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性,表明2组蛋白均可诱发机体产生抗CIAV的抗体.
參攷已髮錶的鷄傳染性貧血病毒(CIAV)VP1基因序列,設計併閤成瞭2對引物,經PCR擴增穫得瞭2箇基因片段.將PCR產物剋隆至pGEM-T Easy載體中,成功構建瞭剋隆載體pGEM-CIAVVP1A和pGEM-CIAVVP1B.將上述重組質粒和原覈錶達載體pMXB10分彆用Nde Ⅰ+EcoR Ⅰ、NdeⅠ+Xho Ⅰ雙酶切,併將純化的2箇基因亞剋隆至pMXB10中,構建齣原覈錶達載體pMXB10-VP1A和pMXB10-VP1B.在0.3 mmol/L IPTG誘導下,目的基因在大腸桿菌ER2566中以分泌型得到瞭大量錶達.Western-blot分析髮現,錶達蛋白具有CIAV抗原性.錶達蛋白經純化後作為包被抗原,用間接ELISA鑒定,與CIAV暘性血清均能髮生特異性反應.2組蛋白免疫SPF鷄後,用全病毒ELISA試劑盒檢測血清呈暘性,錶明2組蛋白均可誘髮機體產生抗CIAV的抗體.
삼고이발표적계전염성빈혈병독(CIAV)VP1기인서렬,설계병합성료2대인물,경PCR확증획득료2개기인편단.장PCR산물극륭지pGEM-T Easy재체중,성공구건료극륭재체pGEM-CIAVVP1A화pGEM-CIAVVP1B.장상술중조질립화원핵표체재체pMXB10분별용Nde Ⅰ+EcoR Ⅰ、NdeⅠ+Xho Ⅰ쌍매절,병장순화적2개기인아극륭지pMXB10중,구건출원핵표체재체pMXB10-VP1A화pMXB10-VP1B.재0.3 mmol/L IPTG유도하,목적기인재대장간균ER2566중이분비형득도료대량표체.Western-blot분석발현,표체단백구유CIAV항원성.표체단백경순화후작위포피항원,용간접ELISA감정,여CIAV양성혈청균능발생특이성반응.2조단백면역SPF계후,용전병독ELISA시제합검측혈청정양성,표명2조단백균가유발궤체산생항CIAV적항체.
