人干燥综合征A抗原克隆表达与重组蛋白及其临床应用研究
인간조종합정A항원극륭표체여중조단백급기림상응용연구
Recombinant Expression of Human sjogren's Syndrome Antigen A and Its Clinical Application
  • 万方数据
    标记免疫分析与临床 표기면역분석여림상
    LABELED IMMUNOASSAYS AND CLINICAL MEDICINE
    2008年 2期 99-104,118 ,共7页

    李倩%高扬%倪安平%李永哲%于孟学%刘音%朱立平%林嘉友%甘晓丹

    리천%고양%예안평%리영철%우맹학%류음%주립평%림가우%감효단

    人干燥综合征A抗原%cDNA克隆%重组体,ELISA 人榦燥綜閤徵A抗原%cDNA剋隆%重組體,ELISA
    인간조종합정A항원%cDNA극륭%중조체,ELISA
    克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测.根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5'和3'非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,经RT-PCR扩增SSA-60kD抗原cDNA.PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导人大肠杆菌DH5,构建重组质粒PET-30a-sSA-60kD.对后者进行酶切鉴定、测序和分析.在大肠杆菌中表达,产生重组融合蛋白.RT-PCR扩增产物为1632bp.PET-30a-SSA-60kD经EcoR I和V双酶切证实含目的基因片段.序列分析提示与GenBank中一致.利用金属螯合亲和层析法和纯化,得到了高纯度的SSA-60kD重组蛋白.成功克隆人SSA-60kD基因,并构建PE-30a-ssA-60kD,建立了ELISA方法,检测了风湿病患者血清中抗SSA-60kD自身抗体.
    극륭인간조종합정A항원기인(SSA-60kD),위SSA항원적표체화사용중조항원건립ELISA법용우자신항체적림상검측.근거GenBank중검색도적인SSA-60kD cDNA서렬,재5'화3'비편마구설계특이성인물,제취인원HeLa세포총RNA작위모판,경RT-PCR확증SSA-60kD항원cDNA.PCR산물순화후련접지재체PET-30a,도인대장간균DH5,구건중조질립PET-30a-sSA-60kD.대후자진행매절감정、측서화분석.재대장간균중표체,산생중조융합단백.RT-PCR확증산물위1632bp.PET-30a-SSA-60kD경EcoR I화V쌍매절증실함목적기인편단.서렬분석제시여GenBank중일치.이용금속오합친화층석법화순화,득도료고순도적SSA-60kD중조단백.성공극륭인SSA-60kD기인,병구건PE-30a-ssA-60kD,건립료ELISA방법,검측료풍습병환자혈청중항SSA-60kD자신항체.
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