中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2011年
4期
659-661
,共3页
黄山%郑金鼎%许健%令狐颖%刘志琴%袁军
黃山%鄭金鼎%許健%令狐穎%劉誌琴%袁軍
황산%정금정%허건%령호영%류지금%원군
心肌钙蛋白T%流式微球分析技术%方法学
心肌鈣蛋白T%流式微毬分析技術%方法學
심기개단백T%류식미구분석기술%방법학
目的 建立流式微球分析技术(cytoometric bead assay,CBA)检测人肌钙蛋白T(cTnT)方法.方法 用鼠抗人的cTnT的单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,然后再用包被好的微球与检测标本进行抗原抗体免疫反应,并加入羊抗人cTnT的多克隆抗体和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的驴抗羊的IgG,室温避光免疫反应一定时间后洗涤一次,上流式细胞仪检测FITC的荧光强度,以此测定标本中cTnT含量.结果 通过正交试验,在100 μl反应体系中,微球含量大约为1.25×106,选择10 μg的鼠抗人cTnT单克隆抗体为最佳加入量,加入标本和抗体后,选择避光反应时间为120 min,洗涤选择一次,选择8 μg/ml羊抗人cTnT多克隆抗体和20 μg/ml FITC标记驴抗羊IgG为最佳工作浓度;方法检测灵敏度为16.0 pg/mL,线性范围是16-5 000 pg/mL,批内重复性变异系数为5.2-11.3%,回收率是94.7-111.5%,高浓度的胆红素、胆固醇和甘油三脂无明显干扰,与Roche Elecsys的电化学发光法有较好的相关性.结论 自建CBA检测cTnT技术性能较好,可在临床工作中推广使用.
目的 建立流式微毬分析技術(cytoometric bead assay,CBA)檢測人肌鈣蛋白T(cTnT)方法.方法 用鼠抗人的cTnT的單剋隆抗體包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微毬上,然後再用包被好的微毬與檢測標本進行抗原抗體免疫反應,併加入羊抗人cTnT的多剋隆抗體和異硫氰痠熒光素(FITC)標記的驢抗羊的IgG,室溫避光免疫反應一定時間後洗滌一次,上流式細胞儀檢測FITC的熒光彊度,以此測定標本中cTnT含量.結果 通過正交試驗,在100 μl反應體繫中,微毬含量大約為1.25×106,選擇10 μg的鼠抗人cTnT單剋隆抗體為最佳加入量,加入標本和抗體後,選擇避光反應時間為120 min,洗滌選擇一次,選擇8 μg/ml羊抗人cTnT多剋隆抗體和20 μg/ml FITC標記驢抗羊IgG為最佳工作濃度;方法檢測靈敏度為16.0 pg/mL,線性範圍是16-5 000 pg/mL,批內重複性變異繫數為5.2-11.3%,迴收率是94.7-111.5%,高濃度的膽紅素、膽固醇和甘油三脂無明顯榦擾,與Roche Elecsys的電化學髮光法有較好的相關性.結論 自建CBA檢測cTnT技術性能較好,可在臨床工作中推廣使用.
목적 건립류식미구분석기술(cytoometric bead assay,CBA)검측인기개단백T(cTnT)방법.방법 용서항인적cTnT적단극륭항체포피재이격활적최기화취분을희미구상,연후재용포피호적미구여검측표본진행항원항체면역반응,병가입양항인cTnT적다극륭항체화이류청산형광소(FITC)표기적려항양적IgG,실온피광면역반응일정시간후세조일차,상류식세포의검측FITC적형광강도,이차측정표본중cTnT함량.결과 통과정교시험,재100 μl반응체계중,미구함량대약위1.25×106,선택10 μg적서항인cTnT단극륭항체위최가가입량,가입표본화항체후,선택피광반응시간위120 min,세조선택일차,선택8 μg/ml양항인cTnT다극륭항체화20 μg/ml FITC표기려항양IgG위최가공작농도;방법검측령민도위16.0 pg/mL,선성범위시16-5 000 pg/mL,비내중복성변이계수위5.2-11.3%,회수솔시94.7-111.5%,고농도적담홍소、담고순화감유삼지무명현간우,여Roche Elecsys적전화학발광법유교호적상관성.결론 자건CBA검측cTnT기술성능교호,가재림상공작중추엄사용.
