南京工业大学学报（自然科学版）
南京工業大學學報（自然科學版）
남경공업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
3期
20-26
,共7页
王成华%王青艳%熊伍平%廖思明%何冰芳%黄日波
王成華%王青豔%熊伍平%廖思明%何冰芳%黃日波
왕성화%왕청염%웅오평%료사명%하빙방%황일파
淀粉酶%密码子偏好%耐酸%耐温%表达
澱粉酶%密碼子偏好%耐痠%耐溫%錶達
정분매%밀마자편호%내산%내온%표체
兼顾大肠杆菌与枯草芽孢杆菌密码子偏好性,优化获得了1个耐酸耐温淀粉酶的基因amyCN1,并将其在大肠杆菌中实现了功能表达.纯化后的重组α-淀粉酶(AM Y1)表征结果表明:在最适pH5.5和最适温度75℃条件下表观米氏常数(Km)值和催化效率(kcat/Km)值分别为20.93 g/L和98.20 L/(g·s)；低浓度的Co2+(1 mmol/L)可以提高30％的淀粉酶活力,Mn2+抑制了大部分活力,包括ca2+在内的其他金属离子影响不显著；高浓度的EDTA(≥50 mmol/L)抑制其活力；生物信息学分析表明,AMY1具有α-淀粉酶家族典型的3-结构域分布,具有1个Ca2+结合位点和5个Zn2+结合位点,活性中心催化氨基酸残基D198和E222位于(β/α)8桶中β折叠片C端一侧.AMY1优良的低pH耐受性和耐温性,有助于木薯淀粉生产燃料乙醇工业液化与糖化同步发酵工艺的实现.
兼顧大腸桿菌與枯草芽孢桿菌密碼子偏好性,優化穫得瞭1箇耐痠耐溫澱粉酶的基因amyCN1,併將其在大腸桿菌中實現瞭功能錶達.純化後的重組α-澱粉酶(AM Y1)錶徵結果錶明:在最適pH5.5和最適溫度75℃條件下錶觀米氏常數(Km)值和催化效率(kcat/Km)值分彆為20.93 g/L和98.20 L/(g·s)；低濃度的Co2+(1 mmol/L)可以提高30％的澱粉酶活力,Mn2+抑製瞭大部分活力,包括ca2+在內的其他金屬離子影響不顯著；高濃度的EDTA(≥50 mmol/L)抑製其活力；生物信息學分析錶明,AMY1具有α-澱粉酶傢族典型的3-結構域分佈,具有1箇Ca2+結閤位點和5箇Zn2+結閤位點,活性中心催化氨基痠殘基D198和E222位于(β/α)8桶中β摺疊片C耑一側.AMY1優良的低pH耐受性和耐溫性,有助于木藷澱粉生產燃料乙醇工業液化與糖化同步髮酵工藝的實現.
겸고대장간균여고초아포간균밀마자편호성,우화획득료1개내산내온정분매적기인amyCN1,병장기재대장간균중실현료공능표체.순화후적중조α-정분매(AM Y1)표정결과표명:재최괄pH5.5화최괄온도75℃조건하표관미씨상수(Km)치화최화효솔(kcat/Km)치분별위20.93 g/L화98.20 L/(g·s)；저농도적Co2+(1 mmol/L)가이제고30％적정분매활력,Mn2+억제료대부분활력,포괄ca2+재내적기타금속리자영향불현저；고농도적EDTA(≥50 mmol/L)억제기활력；생물신식학분석표명,AMY1구유α-정분매가족전형적3-결구역분포,구유1개Ca2+결합위점화5개Zn2+결합위점,활성중심최화안기산잔기D198화E222위우(β/α)8통중β절첩편C단일측.AMY1우량적저pH내수성화내온성,유조우목서정분생산연료을순공업액화여당화동보발효공예적실현.
