CAJ | 학술논문

目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移、血管生成、组织发生等过程中起重要作用,其羧基端大亚基蛋白是该酶的重要组成部分,但由于此蛋白在体内含量少,易降解,很难直接从组织内得到一定数量的蛋白. 本研究利用工程菌表达乙酰肝素酶的大亚基蛋白以期得到相当数量的蛋白,以便进一步用于该酶的抗体制备和功能研究. 方法:从人胎盘cDNA文库中分离乙酰肝素酶蛋白全长编码基因,通过PCR和酶切等方法将乙酰肝素酶大亚基的基因克隆入原核表达载体pGEX-2TK中,测序鉴定序列完全正确后,转化大肠杆菌BL21(PlyS,DE3)进行表达. 结果:工程菌BL21(PlyS, DE3, pGEX-2TK-50 ku HPA)成功表达出乙酰肝素酶大亚基融合蛋白. 诱导1 h后工程菌即开始表达大亚基融合蛋白,在诱导3 h后表达蛋白量达到最高,随着时间的延长,目的蛋白没有被降解. 诱导剂IPTG的浓度对其表达量及其表达形式无显著影响. 此蛋白的表达形式主要为包涵体形式. 低温诱导可见少量可溶蛋白存在. 结论:在大肠杆菌中成功表达了大亚基的融合蛋白. 此蛋白可以用于进一步乙酰肝素酶的抗体制备、免疫鉴定、功能活性等研究.
목적:을선간소매재종류전이、혈관생성、조직발생등과정중기중요작용,기최기단대아기단백시해매적중요조성부분,단유우차단백재체내함량소,역강해,흔난직접종조직내득도일정수량적단백. 본연구이용공정균표체을선간소매적대아기단백이기득도상당수량적단백,이편진일보용우해매적항체제비화공능연구. 방법:종인태반cDNA문고중분리을선간소매단백전장편마기인,통과PCR화매절등방법장을선간소매대아기적기인극륭입원핵표체재체pGEX-2TK중,측서감정서렬완전정학후,전화대장간균BL21(PlyS,DE3)진행표체. 결과:공정균BL21(PlyS, DE3, pGEX-2TK-50 ku HPA)성공표체출을선간소매대아기융합단백. 유도1 h후공정균즉개시표체대아기융합단백,재유도3 h후표체단백량체도최고,수착시간적연장,목적단백몰유피강해. 유도제IPTG적농도대기표체량급기표체형식무현저영향. 차단백적표체형식주요위포함체형식. 저온유도가견소량가용단백존재. 결론:재대장간균중성공표체료대아기적융합단백. 차단백가이용우진일보을선간소매적항체제비、면역감정、공능활성등연구.