上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2006年
2期
135-137
,共3页
董艳%张宏利%冯绮文%陈雪茹%苏青
董豔%張宏利%馮綺文%陳雪茹%囌青
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PCK1基因%克隆%真核表达载体
PCK1基因%剋隆%真覈錶達載體
PCK1기인%극륭%진핵표체재체
目的 构建人PCK1基因的真核表达载体.方法 以人内脏脂肪细胞cDNA为模板, 聚合酶链反应(PCR)扩增PCK1基因编码区的全部序列,克隆入pGEM-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)中,并进行双酶切鉴定.结果 PCR扩增的特异性片段长度为1 972 bp,以此构建的pGEM-T-PCK1克隆载体,经限制性内切酶酶切证实载体中带有PCK1基因的目的片段,与GenBank中的人PCK1基因cDNA序列一致.重组质粒pcDNA3.1-PCK1经KpnⅠ/XbaⅠ双酶切后显示5.1 kb和 2 000 bp左右的2个条带,证明PCK1基因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1(+) 中.结论 成功构建了野生型pcDNA3.1-PCK1重组真核表达载体.
目的 構建人PCK1基因的真覈錶達載體.方法 以人內髒脂肪細胞cDNA為模闆, 聚閤酶鏈反應(PCR)擴增PCK1基因編碼區的全部序列,剋隆入pGEM-T載體中,經限製性內切酶、DNA序列分析鑒定目的基因後,定嚮亞剋隆到真覈細胞錶達載體pcDNA3.1(+)中,併進行雙酶切鑒定.結果 PCR擴增的特異性片段長度為1 972 bp,以此構建的pGEM-T-PCK1剋隆載體,經限製性內切酶酶切證實載體中帶有PCK1基因的目的片段,與GenBank中的人PCK1基因cDNA序列一緻.重組質粒pcDNA3.1-PCK1經KpnⅠ/XbaⅠ雙酶切後顯示5.1 kb和 2 000 bp左右的2箇條帶,證明PCK1基因已成功剋隆到瞭真覈細胞錶達載體pcDNA3.1(+) 中.結論 成功構建瞭野生型pcDNA3.1-PCK1重組真覈錶達載體.
목적 구건인PCK1기인적진핵표체재체.방법 이인내장지방세포cDNA위모판, 취합매련반응(PCR)확증PCK1기인편마구적전부서렬,극륭입pGEM-T재체중,경한제성내절매、DNA서렬분석감정목적기인후,정향아극륭도진핵세포표체재체pcDNA3.1(+)중,병진행쌍매절감정.결과 PCR확증적특이성편단장도위1 972 bp,이차구건적pGEM-T-PCK1극륭재체,경한제성내절매매절증실재체중대유PCK1기인적목적편단,여GenBank중적인PCK1기인cDNA서렬일치.중조질립pcDNA3.1-PCK1경KpnⅠ/XbaⅠ쌍매절후현시5.1 kb화 2 000 bp좌우적2개조대,증명PCK1기인이성공극륭도료진핵세포표체재체pcDNA3.1(+) 중.결론 성공구건료야생형pcDNA3.1-PCK1중조진핵표체재체.
